仪分绪论 紫外.pptVIP

15 30 45 60 75 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 A ρ/mg.L-1 λ= 508nm 标准曲线 Ax X：被测样品溶液 15 30 45 60 75 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 A ρ/mg.L-1 λ= 508nm 标准曲线 ρx Ax X：被测样品溶液 因数法 c c1 ， c2 …… cn A A1 ， A2 …… An c A K= c A cx =K Ax c c1 ， c2 …… cn A A1 ， A2 …… An cx Ax 间隔小 回归方程法 A = a + b c c c1 ， c2 …… cn A A1 ， A2 …… An a，b cx Ax b. 标准对照法 A=εL c A= k Lρ As cs Ax cx = 2. 多组分 吸光度的可加性 Aλ1 =ελ1，M L cM + ελ1，N L cN Aλ2 =ελ2，M L cM + ελ2，N L cN n = 2 测得 L = 1cm ε 校准曲线法 求出 cM ，cN n 个组分？ n 个波长 双波长法(等吸光点法) 优点：能在复杂样本体系中，直接对两种成分进行分析，两组分的吸收曲线可以有部分重叠，能避免背景吸收的干扰。 除被测组分外，所有杂质对光的吸收、折射、散射等效应的累加。 Aλ1 = Aλ1，被 + Aλ1，干 + Aλ1，背 Aλ2 = Aλ2，被 + Aλ2，干 + Aλ2，背 Aλ1，背= Aλ2，背 ΔA=Aλ2，被 - Aλ1，被 + Aλ2，干- Aλ1，干 若 Aλ2，干= Aλ1，干 ΔA = (ελ2，被 L - ελ1，被 L ) c被 A λ λ1 λ2 λ3 A2 A3 A1 被测物 干扰物 测定波长的选择 Aλ1，干= Aλ2，干= Aλ3，干 ΔA尽可能大 选λ1，λ2， 系数倍率法 A λ 被测物 干扰物 λ1 λ2 n Aλ2，干= Aλ1，干 Aλ1 = Aλ1，被 + Aλ1，干 Aλ2 = Aλ2，被 + Aλ2，干 nAλ2 = nAλ2，被 + nAλ2，干 ΔA =Aλ1 – n Aλ2 =Aλ1，被 –nAλ2，被 ΔA = (ελ1 L + nελ2 L ) c被 T 0 5% 100 10% cx cs 50% 将cs溶液的透光度调节至100% 差示分光光度法 ΔA = | As – Ax | = | -lg Ts + lg Tx | = | lg | Ts Tx = εL | cs – cx | 定值 Ts Tx 为定值 Ts 10%→ 100% Tx 5% → 50% 提高准确性 导数光谱法(微分光谱法) 提高灵敏度、分辨率 六、在医学检验中的定量分析 紫外-可见分光法是进行定量分析最广泛使用的、最有效的手段之一。尤其在医院的常规化验中，95%的定量分析都用此法。 [例]双波长法测定新生儿血清胆红素（BB）的浓度： 被测组分：胆红素（BB） 干扰组分：血红蛋白（HHB） 测定波长的选择： λ455 ， λ575 A455 = A455(BB) + A455(HHB) A575 = A575(HHB) 血红蛋白（HHB）: A455(HHB)= A575(HHB) ΔA = A455 – A575 = A(BB)= εlc(BB) 用λ1不用λ3，要让灵敏度越大越好即ελ2-ελ1要大，而这两个值是常量，所以必须使Αλ2-Αλ1大 二、朗伯-比尔定律 1. 透光度，吸光度 I0 It Ia = T I0 =Ia + It It I0 透光度 入射光强度 透射光强度 吸收光强度 吸光度 ( A) : 透光度的负对数 A= - lg T = lg I0 It 溶液对入射光的吸收程度 液层厚度(L)一定时， 吸光度(A) ? 溶液浓度(c) 溶液浓度(c)一定时， 吸光度(A) ? 液层厚度(L) Lambert 发现 : Beer 提出: 绝对的 相对的 Lambert-Beer定律：当某一单色光通过溶液时，溶液的吸光度（A）与溶液的浓度（c）和液层厚度（L）的乘积成正比。 A=εL