人源化抗体的制备.pptx

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制备针对某种肿瘤抗原并应用于临床治疗的人源化抗体;4月刊《自然综述癌症》(Nature. Reviews. Cancer.)“Antibody therapy of cancer”;抗体在杀伤肿瘤中的作用;治疗性单抗识别的肿瘤相关抗原分类;自1997年至今,共有12种抗体获得了FDA【美国食品药品管理局 】的批准用于治疗各种实体瘤和血液系统恶性肿瘤;寻找靶向抗原——基本要求;寻找靶向抗原——不同功能;寻找靶向抗原——应对逃逸机制;为什么要制备人源化抗体?;※单克隆抗体的若干缺陷 人抗鼠抗体 Human antigen mouse antibody (HAMA) 不能有效激活人体中补体和受体相关的效应系统 体内半衰期较短 ;※人源化抗体优点;抗体人源化的基本原则 ;鼠单抗人源化;鼠单抗人源化;鼠抗体(红)和人源化抗体(绿)Fv结构的叠合图;方法步骤;1.获得鼠单抗重轻链可变区的基因片段;2.重轻链可变区基因片段分别连接克隆载体;第一代人源化抗体:??鼠嵌合抗体;;在选择人 FR 时一般有两条途径: 起初的一条是,根据已有晶体结构数据的人源抗体的可变区框架,借助序列比较与分子模建确定在人、 鼠间的种源差异,由其是鼠 FR 中与 CDR 有密切作用 的氨基酸残基,要保留在替换的人源 FR 中。 第二条途径是,在已有的抗体序列库中搜寻与鼠单克隆抗体FR 有最大同源性的人源 FR 用以替换。在选择同源的人 FR 时,先前倡导将 VL 和 VH 作为一个整 体来考虑,寻找最高同源的人 FR。 后来则认为 ,将 VL 和 VH 分开考虑,分别寻找最高同源的对应序列;3.鼠源可变区编码基因进行PCR定点突变;4.构建真核表达系统

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