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Cary Eclipse 荧 光 分 光 光 度 计 荧光分析法的历史 荧光的发现历史 16世纪 Monardes “极可爱的天蓝色” 17世纪 BoyleNewton 荧光现象 19世纪 Stokes 是一种发射光，萤石 ? 荧光 20世纪 荧光分析法发展成为一种高效、灵敏的光谱分析手段 第一台荧光计 1928年 第一台光电荧光计 1952年 第一台商品化的荧光分光光度计 荧光测量的意义： 灵敏度高 比UV-Vis方法灵敏 100 - 1000 倍 UV-Vis方法测量的是一定波长的光透过样品后的衰减，是高背景上的相对值 荧光是样品被激发后发出的光，测量的是低背景上的绝对发光 荧光测量的意义： 选择性好 能吸收光辐射的分子不一定都能发出荧光 共轭?键，刚性平面结构，给电子取代基 能发出荧光的分子结构或介质环境不同，荧光光谱也不相同 吸收（激发）和发射光谱 混合物的分析测定（同步扫描） Excitation and Emission spectra of Anthracene 荧光测量的意义：Why do fluorescence measurements? 分析应用 浓度测量 皮摩尔 材料鉴定 研究光物理化学作用的机理 测量分子动能 荧光分析法的应用领域 生命科学 RNA/DNA研究 蛋白质、氨基酸和酶的分析 细胞内的离子浓度研究： Na+, K+, Ca2+, H+, Mg2+ , Zn2+等 荧光分析法的应用领域 临床、法医分析 荧光免疫分析 蛋白质、氨基酸和酶的分析 细胞内的离子浓度研究： Na+, K+, Ca2+, H+, Mg2+ , Zn2+等 荧光分析法的应用领域 新药研制和药物分析 药物研制： 组合化学 药物分析： 可卡因、吗啡、鸦片碱、巴比妥类、酚噻嗪、阿托品、异烟肼、利血平、色胺、阿司匹林、青霉素、四环素等药物的分析 荧光分析法的应用领域 环境、自来水和污水水质监测 叶绿素、油污染、多环芳烃、表面活性剂等的分析 食品科学 食品添加剂、维生素含量和霉素等的分析 化学、化工和材料科学 常规分析、新化合物的光化学行为研究等 无机离子及其配合物的分析 晶体材料的共振荧光 Cary Eclipse 设计的设计思路 新颖、现代的设计 荧光、磷光、化学/生物发光三种测量模式 先进的Cary 系列软件 波长范围 200nm - 900nm 多种附件可选 Cary Eclipse的设计特点 光源 Light Source 光学元件 Optics 检测器 Detector 软件设计 Software 对光源的要求 稳定 使用寿命长 安装、维护方便 足够的强度 UV-Vis中： Abs = ?bC 荧光分析中：F = kI0 ?bC I0为激发光强度 除了与样品浓度有关外，荧光强度还与激发光强度成正比 Cary Eclipse的闪烁Xe灯模块 低功率消耗 仅12 W 输出功率最高 ~75 KW 普通只有几百瓦 灯的电子采用模块设计，安装维护方便 Cary Eclipse的闪烁Xe灯模块 闪烁Xe灯与Schwarzschild聚光元件的结合，使得Eclipse获得了最高的输出功率 The Power of Xenon! Eclipse的闪烁Xe灯只在测量时开启 避免了连续光源长时间照射造成的荧光衰减和光敏样品的降解 使用寿命长 可连续闪烁20，000小时，保修两年 基本与仪器同寿命，终生不用更换 普通Xe灯的寿命?2000小时 The Power of Xenon! 忽略室内光线的干扰，可开放样品室操作 Dark current correction(before sample) Ratio result =(sample PMT-dark)/(ref PMT-dark) x 1000 卓越的微池测量性能 40