DNA的粗提取和鉴定.ppt

* * * * * 课题 DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 提取DNA的基本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 * DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性） DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA 高温 DNA耐高温 DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 加入洗涤剂 * 1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 提取DNA的原理包括DNA的 两个方面 溶解性和耐受性 1.DNA的粗提取实验原理 * 2.实验材料①动物 鸡血细胞液的优点 提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取 ②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 * 3、方法与过程 1).制鸡血细胞液 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。 离心或静置后去掉上清液 血浆 血细胞 * 关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题： （1）鸡血中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞数目较多，可以提供丰富的 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是 （3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是 ， 这是因为 ， 但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因为 。 （4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 程序，使组织细胞更易分离。 含有完整的、成形的细胞核 红 DNA量，所以一般采用鸡血 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。 在实验中很难提取到DNA 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠白细胞 和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到 肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于DNA的提取 若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。 * 提取细胞核物质：