人教版教学课件以菜花为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定.ppt

实验原理 1、研磨液中的变性剂可使细胞破裂，释放DNA。 2、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质则溶于酒精。利用这一原理，可进一步提取含杂质较少的DNA。 3、沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 目的要求1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定2、观察提取的DNA物质 用具与材料 1、用具 体积分数为95％的预冷酒精、蒸馏水、研磨液、二苯胺试剂；搅拌机、烧杯（100 mL、 50 mL）、纱布、试管（20 mL）、玻璃棒、滴管、量筒（10mL）、镊子、漏斗、纱布、滤纸、三角架、酒精灯、石棉网、试管夹、天平、冰箱等。 2、材料 新鲜菜花 实验过程 （一）课前准备 将新鲜的菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻24h以上，准备各种试剂和实验用具 全班学生分组，每组7-8人为宜. （二）DNA的粗提取 1.取材 ???称取 30 g菜花，去梗取花，切碎。? 2.研磨? ??向碎菜花中倒入10 mL研磨液(课前配制好的)，拌匀，倒入搅拌机充分研磨5 min。 3.过滤 ???将菜花研磨液过滤到离心管中。离心2min，再取上清液倒入烧杯中。 4.沉淀? ??将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷酒精溶液，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)，沉淀3min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。 DNA的鉴定 谢 谢 * §5.1 DNA的粗提取与鉴定 （三）DNA的鉴定 1、取2支20mL的试管，分别编为1号、2号，分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 2、将丝状物用玻璃棒挑起溶于2号试管中（用玻璃棒搅拌，使其充分溶解） 3、各加入二苯胺试剂4ml 4、混匀后，置于沸水浴中加热5min 5、待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 2号试管溶液变为蓝色 使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理，加冷却酒精溶液。 讨论：滤液中可能含有哪些成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 想一想：如果研磨不充分，会对实验结果产生 怎样的影响？ 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多； 二苯胺鉴定出现蓝色，说明实验基本成功， 如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备 成果评价 1、是否提取出了DNA 本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。 2、分析DNA中的杂质 练 习 1、请解释提取DNA的实验操作中主要步骤的目的。 答：提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。 2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗？ 答：提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。 *