实验7动物染色体标本的制备3.ppt

实验 7 动物染色体的制备 --牛蛙骨髓细胞染色体标本的制备、观察 一、实验目的 1.了解制备中期染色体标本的原理。 2.熟悉并初步掌握制备骨髓染色体的操作方法。 * * 染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。 * * 二、实验原理 * * 人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色） * * * * 三、实验用品 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固定液, 蒸馏水，Giemsa染液。 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪，离心管，注射器，染色缸。 材料：肉用成体牛蛙 * * 动物的药物处理（课前已经完成） 牛蛙称重，按每克体重2 μg的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液(用0．65％生理盐水配制)。注射后3.5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。 * * 四、实验步骤 1．每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。每组保证有1根后肢长骨，或者2根前肢长骨。 2．在小烧杯中加入3 ml的0.65％生理盐水，取带针头的注射器，吸入1 ml 0.65％生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑出弃去。 * * 四、实验步骤 * * 四、实验步骤 取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。 * * 四、实验步骤 取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。 * * 四、实验步骤 取后肢3：剪开后的后腿关节。 * * 四、实验步骤 取前肢1：找到关节所在。 * * 四、实验步骤 取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。 * * 四、实验步骤 * * 四、实验步骤 3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置，低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。 4.在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。 5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直立载玻片空气干燥。 注意，每组做2片 45° * * 蒸汽固定法 四、实验步骤 7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染20-30分钟。 8.用蒸馏水稍洗使脱去浮色，吸水纸吸干载玻片底面和周围的水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。 Giemsa染色 改良苯酚品红染色 * * 蒸汽固定法 四、实验步骤 注意事项 1.骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，不易获得较多的中期分裂相。 2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。 * * 五、实验结果 1．找出最好的几个分裂相，数出染色体条数. 2. 画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。 3. 取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？ * * 牛蛙染色体，2n = 26 五、实验结果 * *