微生物培养基的配制和灭菌2012.ppt

Exercise six 微生物培养基的配制和灭菌 目的要求 实验材料 实验程序 目 的 要 求 1.明确培养基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法和步骤。 2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 实 验 材 料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。 仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 其它物品：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、牛皮纸、绳索、棉花、标签等。 实 验 程 序 培养基的配制 微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌方法 实 验 程 序1 （培养基的配制） 培养基的种类 培养基的配制方法和步骤 培养基的配方及配制分组 实验程序1－1 （培养基的种类） 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2～0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 实验程序1－1 （培养基的种类） 常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。 实验程序1－2 （培养基的配制方法和步骤） 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 过滤 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 灭菌 摆斜面 检查：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤） 实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤） 实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤） 培养基的配制和灭菌过程中的注意事项 1.蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。 培养基的配制和灭菌过程中的注意事项 6.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。 实验程序2－1（培养基的配方及配制分组） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下（书中P50和P214）： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 自来水 1000mL