HIV1CRFBC重组亚型耐药相关新突变位点的复制动力学研究.pdf

ZHYF-2014-1202-01468,基础研究 本文编辑：陈丽 HIV 1CRF_BC - 重组亚型耐药相关新突变位点的复制动力学研 究 焦洋 黄洋 李书明 李臻鹏 王彦 殷倩倩 马丽英 DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2015.05 基金项目：传染病预防控制国家重点实验室自主研究重点课题(2011SKLID102)；国家自 然科学基金81172733) ；国家科技重大专项(2009ZX10004-903-006、 2012Z002-002) 作者单位：102206 北京，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 传染病预防 控制国家重点实验室 感染性疾病诊治协同创新中心焦洋、黄洋、李臻鹏、王彦、殷倩倩、( 马丽英 ；北京市朝阳区疾病预防控制中心焦洋、李书明) ( ) 通信作者：马丽英， ： Email mal@chinaaids.cn 【摘要】目的研究HIV-1CRF_BC重组亚型逆转录酶（RT）区耐药相关新突变位点 I132L、T139K/R对非核苷类逆转录酶抑制剂 （NNRTIs）药物敏感性和病毒复制动力的影响。 方法 通过点突变的方法将HIV-1B亚型感染性克隆PNL4-3RT区的第132位和第139位氨基 酸分别突变为亮氨酸（L）和苏氨酸（T）/精氨酸（R），与本课题组已经构建的HIV-1CRF07_BC 亚型RT区I132L和T139K/R突变感染性克隆，共同转染293T细胞系进行病毒包装并检验病毒 感染性。检测突变病毒对于NNRTIs的药物[依曲韦林 （TMC-125 、地拉夫定(DLV 、奈韦拉 平(NVP 、依非韦伦(EFV）]敏感性，及其复制动力学特征。结果 通过点突变的方法成功构 建感染性克隆PNL4-3-RT-I132L、PNL4-3-RT-T139K和PNL4-3-RT-T139R。I132L和T139K/R 在B亚型和CRF07_BC亚型中均能降低HIV-1对于NNRTIs的药物敏感性，体现为半数有效浓 度 （EC50）的升高。在CRF07_BC亚型中，I132L分别使EC50升高2.55、19.35、28.05 和6.13 倍；T139K分别使EC50升高4.67、3.66、7.35、3.30倍；T139R分别使EC50升高1.82、4.69、 25.12 和1.89倍；在B亚型中，I132L分别使EC50升高3.91、4.61、6.38和3.56倍；T139K分别 使EC50升高3.13、1.78、2.26和2.10倍；T139R分别使EC50升高5.79、3.99、5.78和2.75倍。 PNL4-3-RT-132L/139K/139R与野毒株PNL4-3的复制速度相近，且P24均在第11天达到峰值。 但与对照株BC-WT相比，BC-RT-I132L/T139R推迟了P24到达峰值的时间，BC-RT-T139R的 P24值在第14天达到峰值，BC-RT-I132L在第21天达到峰值，且峰值略低。结 HIV-1 CRF_BCRT区新的耐药相关位点I132L和T139K/R在B亚型及CRF07_BC亚型感染性克隆上 均可降低病毒对NNRTIs的药物敏感性，I132L在CRF_07BC亚型的感染性克隆上能够降低病 毒的复制能力。 【关键词】HIV-1；蛋白质亚型；新耐药相关位点；药物敏感性；复制动力学 Replication kinetic properties of HIV-1 CRF_BC novel drugresistanceassociated mutations Jiao Yang ，Huang Yang，LiShuming，LiZhenpeng，WangYan，YinQianqian，MaLiying. State National Centerfor AIDS/STD ControlandPrevention, Chinese Centerfor Disease Controland Prevention, Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control, Collaborative Innovation Centerfor DiagnosisandTre