微生物诊断技术.ppt

微生物感染的诊断技术 天津医科大学医学检验学院 学习内容 免疫学技术 分子生物学技术 细菌检验的自动化 参考书 Microbiology Nina Horne, Samuel Subity Textbook of medical microbiology and parasitology Kenneth J. Ryan 科学出版社 临床微生物学与微生物检验 张卓然 主编 人民卫生出版社 细菌感染的实验诊断 感染性疾病的实验诊断涉及微生物学、免疫学、生化、临床抗生素学、医院感染学、流行病学。 临床细菌实验室主要工作—从临床标本中分离出病原菌，并进行准确鉴定，同时指导临床合理用药。 细菌感染的实验诊断 临床诊断目的： 1）以疾病的病原学诊断为目的，一般鉴定细菌种类，必要时进一步鉴定。 2）为提供治疗方案为目的，进行临床标本的直接药物敏感试验，还可根据病原菌的种类直接提供抗生素的范围和种类。 3）以流行病学研究为目的，对病原菌做进一步鉴定，往往鉴定到型。 4）了解细菌与感染的关系，感染的类型以及细菌的种类并非具有专一性。 第一部分 免疫学技术 免疫学鉴定和免疫学诊断 免疫学鉴定-用已知的抗体检测标本中或分离培养物中的未知病原生物，确定生物的种或型。 免疫学诊断-用已知的病原生物或其特异抗原检测患者血清中相应的特异抗体及效价的变化。 一、凝集反应 1 玻片凝集反应，用已知抗体的诊断血清，在玻片上直接与细菌培养物或细菌悬液混合，若有与抗体相应的细菌，出现肉眼看见的凝集块或颗粒。 2 反向间接凝集试验，将已知的细菌抗体直接吸附或通过化学偶联方法结合于RBC表明，制成抗体致敏细胞，再与被检物混合。 一、凝集反应 3 乳胶凝集试验，将已知的抗体吸附在聚苯乙烯颗粒上，可与相应抗原产生肉眼可见的乳胶凝集现象，借以坚定细菌。 4 协调凝集试验，金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白（SPA）能够与人或哺乳动物的IgG-Fc段结合，使Fc暴露于葡萄球菌的表面，保留其抗体活性和特异性。当金黄色葡萄球菌与已知的IgG抗体连接时，成为致敏的颗粒载体，与相应抗原或细菌接触时，则出现肉眼可见的凝聚现象，借以证明相应的细菌或抗原的存在。 二、免疫荧光技术 1 直接法，将已知抗体用化学方法结合荧光素制成荧光抗体，以此来浸染固定在玻片上的未知细菌。 2. 间接法，将已知抗体与待检细菌标本充分反应后加入荧光素标记的抗IgG抗体，形成抗原-抗体复合物，可与随后加入的荧光标记IgG抗体进一步结合而固定于玻片上，在荧光显微镜下可见荧光出现。 二、免疫荧光技术 3 免疫荧光菌球法，荧光抗体直接染色与增菌培养相结合的方法，培养基中加入一定量的荧光抗体，然后接种标本，若有相应的病原菌，抗体与之结合而凝聚，聚会后得到的细菌继续增殖而聚合成团，在荧光显微镜下称绒球团样荧光。 Indirect ELISA Use to test Ab 第二部分 分子生物学技术 第三部分 细菌检验的自动化 一、微生物鉴定系统发展概况 60年代细菌鉴定方法（手工配制的试剂培养坚定细菌生化反应）。 70年代根据细菌生物学性状和代谢产物的差异，发展了微量快速和生化反应系统，具有简易化、微量化、系统化、商品化和标准化等优点，并实现了从生化模式到数字模式的转化。形成自动化微生物分析系统。 细菌鉴定自动化 二、微生物数码分类鉴定系统 （一）工作原理 （一）工作原理 （一）工作原理 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 （二）数码分类鉴定系统组成和操作 ANOXOMAT MARK II 厌氧微需氧培养系统 三、微生物鉴定药敏分析系统 三、微生物鉴定药敏分析系统 3）操作方法： ①标本得到纯菌落。 ②进行初步鉴定选择试剂条。 ③按试条要求制备菌悬液。 ④接种试剂条经35℃孵育18小时观察结果。 ⑤将结果输人电脑，得到鉴定结果。 三、微生物鉴定药敏分析系统 三、微生物鉴定药敏分析系统 （二）自动微生物鉴定药敏系统 2．Auto Reader自动微生物鉴定／药敏分析仪 2．Auto Reader自动微生物鉴定／药敏分析仪 （三）全自动微生物鉴定药敏系统 （三）全自动微生物鉴定药敏系统 （三）全自动微生物鉴定药敏系统 （三）全自动微生物鉴定药敏系统 （三）全自动微生物鉴定药敏系统 3．Sensititre全自动微生物鉴定／药敏分析仪 3．Sensititre全自动微生物鉴定／药敏分析仪 3．Sensititre全自动微生物鉴定／药敏分析仪 四、微生物自动鉴定药敏分析系统展望 四、微生物自动鉴定药敏分析系统