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重组小鼠ck2 亚基在大肠杆菌中的表达纯化及.pdf
11·60 · 中国药理学通报 Chinese Pharm acological B ulletin 2003 Oct ;19 ( 10) :1160~4
重组小鼠 CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定
梁景耀 陈小文 刘新光 梁念慈
(广东医学院生物化学和分子生物学研究所 ,湛江 524023)
中国图书分类号 R 345 57 ;R 37821 ;R 3942 ;R 446 我们拟将已构建成功的小鼠 CK2α亚基的重组质粒
( )
文献标识码 A 文章编号 2003 1011604 进行诱导表达、纯化及测定其活性。为今后细胞和
摘要 目的 研究重组小鼠 CK2α亚基在大肠杆菌中的表 动物实验打下坚实的基础。现将结果报道如下。
达 ,并进行纯化和活性的测定。方法 将已构建成功的小鼠 1 材料与方法
α
蛋白激酶 CK2 亚基 cDNA 的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL21 1 . 1 材料
(DE3) , IPTG 诱导表达 ,产物依次进行 DE52 、P11 磷酸纤
1 . 1 . 1 菌株与质粒载体 大肠杆菌 BL21 (DE3) 由
维素和肝素Sepharose 柱层析分离 , SDSPA GE 银染。结果
卫生部武汉生物制品研究所引进 , 原核表达载体
重组质粒转化表达菌经 IPTG 诱导后出现一分子量为 42
p T77 由美国哈佛医学院的 Tabor 教授惠赠。
ku 蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 306 % 。从
1 . 1 . 2 试剂 异丙基硫代半乳糖苷 ( IPTG) ,
287 mg 可溶性蛋白质中得到 4 7 mg 纯化蛋白。SDSPA GE
银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的 CK2α和 β亚 DNase I , A TP , GTP , 亮抑酶肽 , 胃抑酶肽A , 硝
基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的 CK2 酸纤维膜购自 Sigma 公司 , DE52 , P11 磷酸纤维素
全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。结论 重组蛋 和 P81 磷酸纤维素滤纸系 Whatman 产品 , 5 ml E
32
γ
白是小鼠蛋白激酶CK2α亚基。 conoPac 肝素亲和层析柱为 BioRad 产品。[ P ]
32
γ
A
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