量子点对神经干细胞标记研究.pdfVIP

’ 第37卷 分析化学(m哪HIIAxI甩) 增刊 ChineseJournal 2009年10月 ofAnalyticalChemistry F014 量子点对神经千细胞标记研究 吕晓菁 隋龙臻 何子剑 谢海燕‘ (北京理工大学生命科学与技术学院，北京100081) 过去十年，神经干细胞研究发展迅速，但很多结果还存在争议，其中一个非常重要的原因在 于没有可靠的技术来稳定地对被移植的干细胞进行充分示踪。量子点的优越荧光性能及其应用的 巨大进展为这一领域提供了良好的契机，相关的研究初露端倪[1,21。本文采用量子点被动吞噬的方 法标记胎鼠脑神经干细胞，在适宜标记条件确定的基础上，研究了标记后干细胞的生长、分化情 况；体外定向诱导分化成神经元和星型胶质细胞的能力。为进一步研究组织以及体内神经干细胞 的定向诱导分化奠定了基础。 取SD大鼠P0乳鼠海马处细胞培养，将传代后的细胞于37℃与一定浓度的量子点共孵育24h， 离心去除多余量子点后，传至培养皿继续培养。将分别与不同浓度量子点进行孵育后的细胞传至 96孔板，待其贴壁30h后进行MTT检测。将分别与不同浓度量子点孵育后的细胞传至盛有包被 玻片的小皿内，然后置于显微镜下观察，以筛选最佳标记浓度。再在该浓度下，将量子点与细胞 于37℃分别孵育6h、12h、18h、24h、30h以确定最佳标记时间。 将被标记的细胞传至盛有包被玻片的小皿，并加10％胎牛血清定向诱导分化7天。然后用神 经元特异性烯醇化酶mSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异抗体分别标记神经元和星形胶质细 胞，研究被标记干细胞的定向分化情况。 MTT结果表明，随着量子点浓度的升高，细胞的存活率逐渐降低，但在41nmol／L浓度下， 细胞存活率仍能保持在60％左右，说明量子点标记会对神经干细胞的生长有一定的影响，但大部 分细胞的生长情况良好，可继续进行下一步的研究。 nmol几，16．4nmol／L，24．6ilmol／L，32．8nmol／L，41 分别用8．2 nmoYL五个浓度的量子点标 记细胞，l天和7天后分别进行成像。结果表明，标记l天后，随着标记浓度的增大，量子点的 标记效率逐步提高，在16．4nmol／L浓度下，几乎所有的细胞都被标记。分化7天后，细胞中量子 点含量明显降低，此时只有经41nmol／L量子点标记的细胞中仍均有量子点，可满足后续观察的 要求，所以选择41 nmol／L为最佳标记浓度。时间梯度实验表明在41nmol／L量子点浓度下，随着 标记时间的延长，量子点的标记效率逐渐增加，并在18h明显增加，在24h趋于稳定。神经干细 胞经10％胎牛血清诱导主要分化成神经元和星形胶质细胞，我们用NSE和GFAP的特异抗体分 别对其进行标记。从图3可以看出这两种分化在对照组和量子点标记组中均存在，说明量子点不 会影响神经干细胞的分化方式。进一步的统计结果也表明两组细胞的分化概率相差不大，说明QDs 标记对神经干细胞分化没有明显影响。这为体外的标记神经干细胞再移植入组织和活体的示踪检 测奠定了基础。 References 1 Ferreira J a1．CellStem 36--146 M，NobreL，et Cell，2008，3：1 L，Karp 2 ShahB E a1．Nano S，ClarkPA，MoioliK，et Lettem，2007，7(10)：3071-3079 本文系教育部新世纪优秀人才资助计划(No．NCET-08-0046)，国家自然科学基金(No，北京理工大学优秀青年教师资助计划 2009ZXl0004-107)资助项目 +E-mail： 万方数据万方数据 量子点对神经干细胞标记研究 作者：