分子诊断技术平台的进展及展望精选.ppt

核酸检测新技术 LAMP/IMSA/RPA Multiplex PCR Nested PCR (一步法） Digital PCR 自动化检测 再测序芯片 PCR 阵列 二代测序（NGS） POCT（现场检测） 现场检测系统（POCT） 免疫学技术 上转发光 胶体金 免疫荧光 核酸技术 定量PCR 微阵列 等温扩增 定量PCR 图 雅培公司生产的Abbott m2000 System 比利时Biocartis 公司的Idylla 多重定量PCR 图 illumipro-10自动化等温扩增和检测系统(应用于LAMP) 图 BD公司Viper系统（应用于SDA） 微流控芯片（和国外合作） 国内商业化的核酸POCT是空白 交叉学科融合 产学研结合 存 在 问 题 超过百分之七十的人类病毒经过科学实验，证明有明确的动物来源。随着检测技术的进步，这个数字还在不断提高。 近年来，动物病毒经过突变和重组，不断获得感染人的能力 （说明研究动物病毒很重要） * * * * 根据其是否有兼并，扩增难易，产物片段大小 根据其引物间的相互作用，Tm值和产物大小 126份临床标本均为住院儿童的鼻咽抽提物‘ 5份多检测，3份漏检 在保守区设计特异性引物，并进行引物验证，溶解曲线分析可得出六种病原体对应的Tm值大小，如图，。。。。。。。 * 根据六种病原体不同的Tm值，进行引物分组，分为两管检测其中，一管中有123， 一管中包含123。通过溶解曲线分析实现了六种不同病原体的区分。 * Advantages of digital PCR（优点） Not rely on external references Increased tolerance to enzyme-inhibiting substances Simultaneous template amplification Superior precision, sensitivity and reproducibility lower coefficient of variation Reduced background DNA and contaminant levels which consequently increases the signal-to-noise ratio in positive reaction partitions 核酸检测新技术 LAMP/IMSA/RPA Multiplex PCR Nested PCR (一步法） Digital PCR 自动化检测 再测序芯片 PCR 阵列 二代测序（NGS） POCT（现场检测） 自动化高通量检测 Beckman Biomek NX/FX型 实验室自动化工作站 主要特点：单臂或双臂，96道、384道或智能八道加样器供选，24个微孔盘工作区，多种分注功能及配件定位器可选 未知病原检测 再测序芯片（RPM） PCR 阵列（PCR array) 二代测序 （NGS） 基于GCS 3000 TG系统的基因芯片再测序技术 智能化的分析软件 芯片滚动杂交仪 芯片洗涤工作站 定制基因芯片 高分辨率的芯片扫描仪 未知病原—RPM 完成4种不同症候群（呼吸道感染，7科23属；胃肠道感染，6科13属；脑炎和神经系统感染，6科17属；病毒性出血血热相关，4科10属）的相关病毒性病原体的全部引物和探针的生物信息学分析、设计和芯片定制（650片）和储备 建立了呼吸道感染和胃肠道感染再测序检测芯片技术平台 RPM-Flu3.1： FluA(35%) 12种病毒 21种细菌 RPM-IVDC1： 86种病毒亚型 22种细菌 Plos One,2013 8(9) : e75704 Frontier in Microbiology,2015 (accepted) Resequencing Pathogen Microarray 再测序芯片（RPM） 高通量自动化的脑炎症候群检测PCR Array方法 方法建立的基础 1：样品体积扩大 RNA μL cDNA μL 自动化 6 40 RNA cDNA 方法所需样品量32μL（16个孔） 方法建立的基础 2：96孔板的分配 特点： 1.引物组在96孔板上的分布是模式化的。 2.更快的分配体系。 3.节省了样品编号的时间。 引物组可以安排在同一个整行或整列 也可以平均分配整行或者整列 A B C D E F G H 1