除草剂骠马对草鱼遗传毒性的研究.pdfVIP

农业环境科学学报 2006，25(2)：295—300 JournalofAgro—EnvironmentScience 除草剂骠马对草鱼遗传毒性的研究 陈家长 ，杨 林 ，胡庚东 ，瞿建宏 ，吴 伟 ，范立民 (1．中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，中国水产科学研究院内陆渔业生态环境和资源重点开放实验室，江苏 无锡 214081； 2。南京农业大学无锡渔业学院，江苏 无锡 214081) 摘 要：通过除草剂骠马对草鱼的急性毒性试验，确定其96hLC，0为0．078mg·LI。用骠马96hLC 的1／3剂量染毒草鱼，抽取染毒 前后的草鱼血液提取基因组DNA，选用20个随机引物对草鱼基因组DNA进行RAPD扩增，研究了除草剂骠马对草鱼的遗传毒 性。结果表明，在所选用的20个随机引物中，S12、S14、$20能检测出用骠马染毒前后草鱼基因组DNA的差异，除草剂骠马对草鱼 具有一定的遗传毒性。RAPD技术可运用于检测鱼类的基因突变情况。 关键词：除草剂；骠马；急性毒性；草鱼；RAPD 中图分类号：X835 文献标识码：A 文章编号：1672—2043(2006)02—0295—06 GeneticToxicityoftheHerbicidePuillaSupertoGrassCarp CHENJia—zhang’，YANGLin，HUGeng-dong，QuJian-hong，wUWei，FANLi-min (1．KeyOpenLaboratoryofEcologicalEnvironmentandResourcesofInlandFisheries，FreshwaterFisheriesResearchCentre，Chinese AcademyofFisherySciences，Wuxi214081，China；2．FisheriesCollege，NanjingAgricultureUniversity，Wuxi214081，China) Abstract：TheacutetoxicityofPumasupertograsscarpswasstudied，andLC∞valueforthefishat96hwas0．078mg·L-．Pumasuperwere injectedintograsscarpswiththedosageof0．026mg·kg(1／3ofLC at96h)．Bloodweredrawnfromcaudalveinbeforeandafterinjection withheparinsodium anti-coagulatedsyringes．Then30txLofbloodwereaddedto470txLofsalineEDTA—Trisbuffer． Afteraddingfinal concentrationsof20％ SDSand10mg·mL～proteinaseK，themixturewasincubatedovernightat55~C．TheDNAwasextractedandpurified bysuccessiveextractionswithphenol，phenol：chloroform：isoamylalcohol(25：24：1)andchloroform．ThentheDNAwasprecipitatedwithice— coldabsoluteethanolandwashedwith70％ethano1．TheDNApelletwasdriedandresuspendedinTris-EDTAbuffer(pH8．0)．TheDNAsin everyexperimentalgroupweremixedanddiluted10~100timesforthePCRtemplate．20arbitraryprimers(purchasedfromShanghaiSangon BiotechnologyCoproration，productcode：S1~$20)wereusedtoamplifythegenomicDNAofgrasscarp．Theamplificationreactionwas perfomredin2．5 L10xPCR-Buffer,2 L25mmol·L～MgC12，1 LdNTPs。0．5txLTaqDNApolymerase， primet,5txLtemplate DNA，andddwinflfinalvolumeof25 L_Thereactionparameterswere：predenaturingfor5minat94℃，thendenaturin