一个NBS-LRR蛋白质基因转化水稻及其超量表达.pdf

第 49卷 第 4期 厦门大学学报 (自然科学版) Vo1．49 No．4 2010年 7月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Ju1．2010 一 个 NBS-LRR蛋 白质基因转化水稻及其超量表达 郭立佳，毛 倩 ，汪 卫 ，李 敏 ，彭西英，陈 亮 (厦f-j大学 生命科学学院，细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室．福建 厦门361005) 捅要 ：水稻 0sxoc1334是一个编码NBS-LRR类蛋 白质的基因，通过构建该基因的超量表达载体，并在农杆菌EHA105 介导下转化中花 11号水稻 ，最终获得 6株再生水稻植株．对抗性愈伤组织和再生植株用 GUS组织化学染色检测 ，结果 抗性愈伤组织和 6株再生水稻植株均可染上蓝色，而野生型植株不变色，用潮霉素磷酸转移酶基因的特异引物进行 PCR 鉴定，再生植株均可扩增到 目标条带而野生型植株则不能，表 明0sxoc1334基 因已随T-DNA整合到再生水稻植株基 因 组中．采用半定量和荧光定量PCR分析转基 因水稻的0sxoc1334基因表达 ，结果其中3株转基因植株 的0sxoc1334基 因 平均相对表达量明显增强，其 中 l株为野生型植株的23．5倍．这为进一步鉴定该基因功能奠定了基础。 关键词 ：抗病基因；细菌性条斑病菌；转基因水稻；基因表达；荧光定量PCR 中图分类号 ：Q356．1 文献标识码：A 文章编号：0438—0479(2010)04—0552．06 水稻 (OryzasativaL．)是重要的粮食作物 ，其产 量受病虫害等重要因素的影响，其 中水稻细菌性条斑 1 材料与方法 病 (Bacterialleafstreak)是仅次于水稻 白叶枯病 (Bae— terialleafblight)的又一重要细菌性病害，培育抗细菌 1．1 0sxoc1334超量表达载体的构建 性条斑病的水稻品种是防治该病害的重要策略．迄今 以携带 0sxoc1334基因全长 cDNA的质粒 DNA 水稻的细菌性条斑病抗性基因尚未被发掘 ，Zhao等曾 为模板 ，用引物 g1334一EIf(5一AAGATATCAGAA— 报道玉米的Rxol基 因在水稻中能够介导对细菌性条 CAGGGAGACAGCAA一3)(戈Ⅱ线为 EcoR I识别序 斑病的抗性[1]，该基 因编码 的蛋 白质包含 NBS—LRR 列)和 g1334一EVr(5 GAGAATTCACAAACAAC— 结构 ，属于 NBS-LRR类抗性蛋 白质．已知的水稻 白叶 GACACAGAG-3)(划线为 EcoRV识别序列)进 行 枯病抗性基 因 Xal[2]，水稻稻瘟病抗性基 因 Pita、 PCR扩增，扩增反应体系为 ：5 L的 10×Pyrobest Pi9、Pi37和 Pib等L3 都属于 NBS—LRR类抗病基 BufferI，4肚L的dNTPMixture(各2．5mmol／L)、 因，可见 NBS—LRR类基因在水稻的抗病基 因中占据 1．5U的PyrobestTMDNAPolymerase、各 1 L的 1O 相当的比例．本研究的 0sxoc1334基 因是采用蛋 白质 mmol／L正 向和反向引物 、1Ong质粒 DNA，最后用双 组学方法分析细菌性条斑病菌 (Xanthomanasoryzae