Eppendorf细胞培养板.PDF

Eppendorf 细胞培养板 —— 简单有效地降低边缘效应的方法 边缘效应是多孔细胞培养板，尤其是 96 孔细胞培养板常见的 一种现象，即外周细胞粘附和生长不均匀。细胞密度会影响细 胞生长速度、细胞代谢和细胞分化，因而造成实验结果不准确。 造成边缘效应的两个可能因素是蒸发和温度梯度。 目前常用的解决方法是培养板边缘一圈孔空着，这样至少浪费 30% 以上培养板面积，从而间接增加使用成本；或者额外在 孔内添加培养基，以保证其他孔中细胞生长的均一性。但这些 都不是解决问题的根本方法。 图：边缘效应 — 96 孔板外周孔细胞呈典型的月牙状生长 Eppendorf 培养板具有 Chimney-well 独立孔井设计，即可通 NIH3T3 细胞培养 24 小时后结晶紫染色 过给孔外区域加注不含血清培养基，提高培养板的温度稳定性 和均衡的湿度环境，从而减少或消除边缘效应。 图：Eppendorf 培养板的 Chimney-well 独立孔井设计 Eppendorf 96 孔培养板和其他品牌 96 孔培养板内细胞分布的比较 实验操作： 品牌 A, B, C 的培养板孔间无法加注任何液体，品牌 D 培养板内加入 4 × 1.75 mL 培养基，Eppendorf 培养板加入 5 × 1.75 mL 培养基，接种细胞前先在 37 °C 孵育 1 小时。接种 NIH3T3 细胞，接种密度为 5 × 103/ 孔，每孔 100 mL 培养 24 小时后用 11% 的戊二醛固定 15 分钟，然后用结晶紫室温染色。 Eppendorf 96 孔细胞培养板 品牌A 品牌 B 品牌 C 品牌 D 3 图：不同品牌 96 孔板中细胞生长的均一性比较。NIH 3T3 细胞的接种密度为 5 × 10 / 孔， 培养 24 小时后固定细胞并用结晶紫染色。