Bt菌株中Cry1Ia和Cry2Ab结构域交换突变体的表达形式.pdf

山西农业科学 2015，43(6)：66g-670 JournalofShanxiAgriculturalSciences doi：10．39696．issn．1002-2481．2015．06．09 Bf菌株中Cry1la和Cry2Ab结构域交换突变体的表达形式 高建华，牛 鑫，常亚男，任善崇，郑永松，霍利杰 (山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801) 摘 要：前期构建了一系列Crylla和Cry2Ab蛋白的结构域交换突变体，并在 菌株中获得了可观的表达。对6种 突变体的表达形式及分泌与否进行了分析和检测。结果显示，6种突变体在 中以包涵体的形式存在于菌液沉淀 中；这些包涵体与正常cry蛋白形成的晶体不同，不能溶于Na2CO缓冲液。蛋白印迹法检测结果显示 ，带有CrylIa 分泌信号肽的突变体IAA，IIA和IAI蛋白未分泌到胞外，这可能是由于蛋白表达量过陕，迅速聚集而形成包涵体， 从而无法分泌到胞外。 关键词：Cry蛋白；结构域交换突变体；胞外分泌；包涵体 中图分类号：$476．1 文献标识码 ：A 文章编号：1002-2481(2015)06-0668-03 StudyontheExpressionPatternofDomain-exchange MutantsofCryllaandCry2AbinBtStrain GAOJian-hua，NIUXin，CHANGYa-nan，RENShan-ehong，ZHENGYong—song，HUOLi-jie (CollegeofLifeSciences，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China) Abstract：Inthestudy，weresearchedhteexpressionpatternofthe6domain—exchangemutants，constructedpreviously，inBacil— lua thuringiensis．Theresulm showedhtatallofthe6mutantsexpressedinhJghlevelastheinclusionbodies．Theseinclusionbodies couldnotdissolvedinNa2C03bufferinwhichWassimilarwiththepHofcaterpillrasmidgut．Threeofthesemutants(IAA，IIAandIAI) containspredictedsecretionsignalpeptides(PSSP)，butnoneofhtemcouldbedetectedinhtesupematantofthecellmediumbywestern blotanalysis．Th ismaybeduetotherapidaccumulationoftargetproteinmoleculeswhenexpressedincell，resultingininsolubleinclu- sionbodies，finally． Keywords：Cryprotein；domain-exchangemutant；exocytosis；inclusionbody 大部分 Cry蛋 白(Crystalprotein)在 (苏云金芽 笔者前期以Crylla和Cry2Ab为亲本，构建了 孢杆菌，Bacillusthuringiensis)孢子形成期表达，形 一 系列的结构域交换突变体，并在 中获得了较 成伴孢晶体 l_【2】。这种伴孢晶体大多具有规则的立体 高表达。本试验将对这些突变体在 中的表达形 结构，如双锥体、立方体、球体等n【。这些晶体能够溶 式和体外可溶性进行研究。另外 ，IAA(cry-IAA基 于碱性环境(很多昆虫幼虫中肠 ，尤其是鳞翅 目昆 因)、IIA(cry—I1A基因)和 IAI(cry-IAl基因)蛋 白， 虫幼虫 ，为碱性3【】)，