保温小室在组织芯片免疫组化中避免边缘效应的作用.PDF

临床与实验病理学杂志　ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ　２０１２Ｍａｒ；２８（３） ·３２１· 保温小室在组织芯片免疫组化中避免“边缘效应”的作用 １ １ １ ２ ２ ２ 涂镇波 ，李　玲 ，冯安林 ，黄　朋 ，李晓龙 ，周素芳 摘要：目的　探讨保温小室在组织芯片免疫组化中避免“边 然冷却，ＰＢＳ摇洗３×３ｍｉｎ。为防止在芯片上滴加的反应液 缘效应”的作用。方法　采用常规免疫组化 ＳＰ两步法，实 溢出，在滴加各种反应液前，第一组肺癌组织芯片应用保温 验分为两组，一组采用保温小室，另一组采用免疫组化ＰＡＰ 小室，不加盖；第二组肝癌、鼻咽癌及胃癌使用免疫组化ＰＡＰ 笔，同时改良抗体滴加方法。结果　４０例肺癌组织芯片采 笔对组织芯片周围画圈。随后步骤相同，均为滴加 ３％ ＨＯ溶液封闭内源性过氧化物酶 １０ｍｉｎ，ＰＢＳ摇洗３×３ 用保温小室，３２例肝癌组织芯片、各４０例胃癌及鼻咽癌组 ２ ２ 织芯片使用免疫组化ＰＡＰ笔，分别计算边缘组织和中央组 ｍｉｎ。滴加牛血清封闭液封闭非特异性抗原２０ｍｉｎ，甩干。 织平均光密度值。经统计发现不论是采用保温小室或免疫 加入ＰＢＳ稀释的兔抗人Ｃａｌｐｏｎｉｎ２一抗（１∶２００），４℃过夜， ＰＢＳ摇洗３×３ｍｉｎ。加入辣根过氧化物酶标记的抗兔二抗 组化ＰＡＰ笔，４种组织切片边缘与中央部位平均光密度值相 （即用型）检测系统，３７℃温育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ摇洗３×３ｍｉｎ。 比，差异无统计学意义。结论　采用保温小室较免疫组化 ＤＡＢ显色，蒸馏水洗终止显色；苏木精复染、水洗，分化后充 ＰＡＰ笔更为简单易行，在组织芯片免疫组化染色时避免“边 分水洗返蓝；常规脱水透明，中性树胶封固。用已知阳性的 缘效应”方面保温小室可取代免疫组化ＰＡＰ笔。 肝癌组织切片做外部阳性对照，并用皮肤癌组织与待检测组 关键词：组织芯片；免疫组化；边缘效应；保温小室 ［３］ 织在同一张切片上进行内部对照 ，用 ＰＢＳ代替一抗做阴 中图分类号：Ｒ４４６　　文献标识码：Ｂ 性对照。 文章编号：１００１－７３９９（２０１２）０３－０３２１－０２ １．３　计算标准　在４００×视野拍摄图像后经ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓ ［４］ ６０图像分析软件计算平均光密度值 。 　　组织芯片可用于原位杂交以及免疫组化来检测细胞内 １．４　统计学处理　采用ＳＰＳＳ１３０统计软件对数据进行统 ［１］ 成分 ，但由于组织芯片每个微阵列与普通切片组织相比体 计学处理、分析，计量资料进行两样本比较ｔ检验。 积较小，易出现“边缘效应”（指因液体表面张力使液体向中 央收缩、试剂边缘挥发较快、滴加液体量不够以及其它人为 ２　结果 原因导致干片等造成的组织边缘呈现假阳性或背景色较深 ［２］ 　　分别计算采用保温小室和免疫组化ＰＡＰ笔的两组组织 的一种现象 ）。本研究采用组织芯片免疫组化法检测肝