反向模式-强阳离子交换-反向模式二维色谱法测定人血浆中甲氨蝶呤浓度.pdf

第43卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 1期 2015年 1月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 146～150 DOI：10．1lS95／j．issn．0253-3820．140709 反 向模式-强阳离子交换．反向模式二维色谱法测定 人血浆 中甲氨蝶呤浓度 盛阳昊 刘丹琦 王 萍 周伯庭 “ (中南大学湘雅医院药学部，长沙410008) (中南大学药学院，长沙 410013) 摘 要 建立了反向模式一强阳离子交换一反向模式 (Reversedphase．strongcationexchange—reversedphase)二维 色谱平台测定人血浆 中甲氨蝶呤浓度的方法。样品经三氯醋酸沉淀蛋 白后，在 ASTONC。一级柱 (100mm× 4．6mm，5 m)上完成初分离 ，通过六通阀切换，经ASTONSCX中间级(20mmx4．6mm，5 m)二次分离和 储存 ，在SACC 二级柱 (100mm ×4．6mm，5txm)上完成最后分离，并测定。一级柱流动相为 10mmol／L醋 酸铵 ·乙腈 (90：10， ，以醋酸调至 pH3．8)，流速为 1．0mL／min；中间级流动相为 10mmol／LHPO 溶液 (pH3．0)；二级柱流动相为50mmol／L醋酸铵一乙腈 (87：13， ，以醋酸调至pH5．2)，流速为 1．2mL／min， 检测波长 306lflm。单次分析时间4min，线性范围0．09～5．1I~mol／L，检出限为0．005~mol／L，日内RSD小于 1．8％，13间RSD小于3．5％，相对回收率99．1％ ～101．25％，绝对回收率85．7％一86．4％。本方法简便、准 确，适合 日常血药浓度监测和药代动力学研究。 关键词 二维色谱；甲氨蝶呤；高效液相色谱法 1 引 言 甲氨蝶呤(MTX)为二氢叶酸还原酶抑制剂，通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶，阻止二氢叶酸还原 为四氢叶酸，推迟和阻碍DNA和RNA的合成，发挥抗肿瘤作用，被广泛用于治疗急性淋巴细胞 白血病 等恶性肿瘤疾病。临床上采用大剂量甲氨蝶呤联合甲酰四氢叶酸钙(Calciumfolinate，cv)解救疗法治 疗儿童急性淋巴细胞性 白血病，由于该疗法都是超常规大剂量静脉滴注，易产生严重的甚至致命的毒 性反应，例如肾衰竭、骨髓抑制、肝损害、胃肠道反应、皮肤黏膜反应等，且剂量与血药浓度个体差异 大，必须开展MTX血药浓度检测 。测定甲氨蝶呤的方法现主要有荧光偏振免疫法 (FPIA) 和高效 液相法_3娟J。荧光偏振免疫法需要进 口免疫试剂盒，因价格高而限制了在临床使用；高效液相具有专一 性强、准确度高的特点，大多数文献都是基于一维色谱与不同的检测器联用，如紫外 J、荧光 、质 谱r 等，其中，液相色谱．质谱联用法灵敏度高，分析速度快，但预处理过程复杂，且购置仪器成本较高。 本研究采用二维色谱平台，加上压缩控制流路抑制大体积进样和二维色谱死体积大而造成的峰展宽，运 用SCX中间级对色谱网络进行串联修改，实现了样品的大通量快速检测，显著减少了人为干预度和单 次分析时间，适用于大样本临床药物浓度测定和药代动力学研究。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 RP—SCXRP二维色谱平 台：3个 LC-20A泵、CBM-20A色谱控制器、SIL-20A 自动进样器 (改装 500~L进样环)、DGU-20A 自动脱气机、SPD一20A紫外检测器、2个 FCV一12AH六通阀，以上各组成单元 均购 自日本岛津公司；FLC2420柱温箱、ASTONC 一级色谱柱 (100mmx4．6mm，5 m)、ASTONSCX 中间级 (20mmx4．6mm，5 m)、SACC 二级柱为 (100mmx4．6mm，5 m)，均购 自长沙ANAX分析 仪器有限公司；电子天平；PHS-3SPH计 (上海精科)，XW一80A涡旋混合器 (上海青浦西仪器厂)；高速 离心机 (杭州奥盛仪器有限公司)。 2014-08—19收稿；201