人类免疫缺陷病毒抗体.docVIP

湖南省职业病防治院 作业指导书 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 文件编号 版 号：第 2 版 编 写：李毅刚 审 核： 批 准： 2011年 月 日 200 年 月 日 200 年 月 日 修改记录 修改页码 修 改 内 容 修改人 批准人 生效日期 湖南省职业病防治院作业指导书 文件编号： 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 版 号：第 1 版 页码1/2 1、目的 用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。 2、范围 适用于献血员筛查与临床病例。 3、职责 检测人员按照本规程进行检测操作。 4、原理 采用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体。 5、样本要求 5.1仅限于检测人体血清或血浆。 5.2常规方法采集。 5.3血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。 5.4血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。 5.5如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2℃-8℃。如果样品不能在7天内测定，应将血清或血浆与血细胞分离， -20℃保存，避免反复冻融。 6．分析系统 6.1分析仪器：Thermo Mk3型酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 6.2 37℃恒温箱。 6.3 振荡器用于样品、试剂的混匀。 6.4 微量加样枪。 6.5 试剂准备： 试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37℃。 取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。 ?? 6.6 质控试剂：-20℃保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。 7、分析步骤 7.1 样品编号：从6号开始编号。 7.2设阴性对照3孔，Anti-HIV-1阳性对照1孔，Anti-HIV-2阳性对照1孔，分别加入阴、阳对照各50微升。 7.3每个标本待测孔加入标本血清50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。 7.4手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 7.5每孔加酶标工作液50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。 7.6手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 7.7 每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育10分钟。 7.8 每孔加入终止液50微升，混匀。 7.9 选取相应的程序号，用酶标仪双波长比色。 8、计算 Cutoff值=阴性对照平均A值+0.15。 9、参照区间 9.1 阴性对照A值应≤0.12 9.2 Anti-HIV-1阳性对照A值应≥0.8 9.3 Anti-HIV-2阳性对照A值应≥0.8 10.临床意义 样品A值≥临界值为HIV抗体阳性 样品A值＜临界值为HIV抗体阴性 11.注意事项 11.1 从冷藏环境中取出试剂盒应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后再行测试。 11.2使用前试剂应摇匀。 11.3须确保样品加样量准确，如果加样量不准确，可能会导致错误的结果，建议使用微量移液器加所有组份；用滴瓶滴加时，应先弃去1~2滴，垂直匀速地滴加。避免在加样过程中，将液体接触到或溅到微孔边缘上。 11.4 封片不能重复使用。 11.5 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。 11.6 不同批号的试剂不可混用。 11.7 本试剂盒应视为有传染物质，请按传染病实验室检查规程处理。 12.支持性文件 12.1全国临床检验操作规程（第3版） 12.2 刘锡光，祁自柏等，病毒性肝炎实验诊断学。人民卫生出版社，1999,357 12.3 李金明，等。临床酶免疫测定技术。人民军医出版社，2005,87 12.4 人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明书