植物血凝素PHA说明书.doc

植物血凝素(PHA) 植物血凝素(phytohaemagglutinin)(PHA)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞-淋巴细胞。是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体；增强免疫细胞-浆细胞产生特异性抗体的质和量。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。 我公司共投资300万元，用4年的时间经过多年试验终于摸索出植物血凝素（PHA）的提取方法，利用国际最先进的超低温冷冻方法从红芸豆中提取出纯度可达99.9%的植物血凝素（PHA），填补了国内空白。 PHA的作用机理： 1．PHA刺激T细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞；效应T细胞分泌产生大量细胞因子（如白细胞介素、干扰素等）杀伤病毒；细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。 2．PHA可刺激B细胞转化为浆母细胞然后增殖分化为浆细胞，浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。同时可以刺激机体免疫细胞-浆细胞产生特异性抗体的质和量；提高机体的免疫力。 我公司研究植物血凝素（PHA）在动物疾病防治上的应用，主要进行了以下试验： 1．利用鸡白细胞、脾细胞、鸡胚成纤维细胞以有机锗Ce-132、新城疫弱毒株NDV-F、植物血凝素（PHA）、聚肌胞PolyI：C为诱生剂，对外源性干扰素IFN诱生条件如诱生剂量、诱生时间及培养条件进行了比较分析和探讨，结果发现以Ce-132诱生IFN的能力为最强，其他依次为PHA、NDV-Ｆ、PolyI：Ｃ；且鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞；并且最佳诱生剂量依次为：Ce-132为70微克／毫升；鸡HDV-Ｆ为128HAU／毫升；PolyI：Ｃ为60微克／毫升；PHA为20微克／毫升。该研究表明，植物血凝素（PHA）在机体内刺激机体产生干扰素的能力是聚肌胞的30倍，所产生的作用是直接服用干扰素的300倍，所以服用1mg植物血凝素（PHA）相当于服用30mg的聚肌胞和直接使用300mg干扰素。 2．PHA对家禽的新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、脑脊髓炎、流感等疾病的预防及治疗效果。结果表明PHA对上述病毒感染的保护率分别为新城疫77.5%、传染性法氏囊病92.5%、传染性支气管炎85%、传染性喉气管炎77.5%、脑脊髓炎90%、流感80%。 ?　　　　　　植物血凝素（PHA）对鸡常见病毒病的疗效研究 为了验证植物血凝素（PHA）对新城疫、传染性法氏囊病、鸡肾型传支等6种病毒病的预防效果，指导临床合理用药，特进行了本试验。 1 材料和方法 1.1 药物 植物血凝素（PHA），由生化试剂公司提供。 1.2 试验动物及分组 1日龄AA肉鸡520只,购自某鸡场,用温控育雏笼正常饲养，从21日龄开始给药，至28日龄用于试验。随机分为3组，每组40只，处理详见表1。（略） 1.3 攻毒用毒株 NDV强毒，IBDV强毒，肾型IBV强毒，ILTV强毒，AEV强毒，HAV强毒，中国农业大学动物医学院预防医学系传染病组馈赠。 1.4 人工发病 参考常维山等方法，即种毒经37℃水浴融化，用灭菌生理盐水加双抗20倍稀释后，4℃冰箱作用30分钟，按每胚0.2ml接种10日龄SPF鸡胚，37℃孵育，弃去24h内死亡鸡胚，接毒后36h将鸡胚放入4℃冰箱过夜，无菌收集尿囊液。除健康对照组外，其余各组进行人工感染各种毒株强毒,感染剂量1ml含毒尿囊液，滴鼻或点眼0.5ml，肌肉注射0.5ml。同时鸡舍断电降低舍温、适当减少饮水供给以诱使发病。 1.5 预防试验 28天后按表1进行感染，试验期14天，每天定时观察各组鸡的采食、饮水、精神状况、临床症状，记录死亡情况，并对病死鸡进行尸体剖检。 1.6 疗效评价指标 1.6.1 死亡率：具有各种传染病的典型症状及病变的死亡鸡占该试验组鸡的百分比。 1.6.2 治愈率：经用药治疗后，存活病鸡临床症状完全消失的占该试验组鸡的百分比。 1.6.3 数据统计处理：用常规统计学方法（X2检验)对各组死亡率、治愈率进行显著性检验。 2 结 果 试验期各用药组存活鸡的临床症状逐渐减轻消失，精神、采食、饮水逐渐恢复正常；用药组死亡率明显低于感染对照组，剖检可见同一时间死亡的病鸡比感染对照组病变轻。各组的死亡率、治愈率，见表2。（略） 3 结论与讨论 PHA主要通过诱导干扰素产生，提高机体免疫力，达到预防疾病的效果。从本试验结果可看出，PHA对家禽的新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、脑脊髓炎、流感等疾病的预防效果明显，治愈率分别为新城疫77.5%、传染性法氏囊病92.5%、传染性支气管炎85%、传染性喉气管炎77.5%、脑脊髓炎90%、流感80%. 植物血凝素(PHA) 形状： 白色疏松团