JAM―A在甲状腺乳头状癌诊断及临床预后中应用价值.doc

JAM―A在甲状腺乳头状癌诊断及临床预后中应用价值 　　[摘要] 目的 观察连接黏附分子A（junctional adhesion molecule A，JAM-A）在人甲状腺乳头状癌和正常甲状腺组织中的表达情况，初步探讨其表达与临床病理特征之间的关系，进一步观察其表达与淋巴转移的关系。 方法 通过免疫组织化学染色法检测120例甲状腺乳头状癌组织和60例正常甲状腺组织中JAM-A蛋白的表达情况。结果 JAM-A在正常甲状腺组织、不伴有淋巴结转移的原发甲状腺癌组织、伴随有淋巴结转移的原发甲状腺癌组织中的阳性表达率逐渐降低。JAM-A在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织间比较，差异有统计学意义（P0.05）。120例甲状腺乳头状癌中，女92例，男28例；年龄18～76岁，中位年龄48岁；肿瘤直径0.1～5.0 cm，其中瘤体直径0.05），具有可比性 1.2 实验方法 采用免疫组织化学SP染色方法，进行染色标记JAM-A抗体。具体操作过程如下：（1）标本均经过石蜡切片、脱蜡和水化三重HE标本制作全部标准流程后，利用新配置的蒸馏水冲洗3次已经制备好的切片，每次冲洗玻片3 min；（2）使用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，室温下孵育8 min或水浴箱孵育3 min左右；（3）接着以上步骤用新配置的蒸馏水冲洗2次，每次大约5 min，然后放置在高温压力锅中进行组织抗原的修复，用新配置的PBS液体（pH 7.4）冲洗3遍，每次冲洗3 min；（4）在室温下在玻片上小心滴加4%羊血清封闭 30 min，尽量减少组织的非特异性染色；（5）载玻片上滴加一抗，室温孵育60 min；（6）然后用新配置的PBS缓冲液体冲洗3次，每次冲洗4 min，利用滴加二步的方法MaxvisionTM/HPR孵育15 min；（7）利用PBS缓冲液体冲洗载玻片3次，平均每次5 min。（8）轻轻甩去PBS液体，滴加新鲜配制的DAB显色液2～5 min左右，最后在光学显微镜下观察染色情况，抗体的阳性信号为棕黄色或棕褐色颗粒着色，着色定位在细胞胞质中。染色显色的时间为3 min左右，然后终止该反应，用自来水充分冲洗切片。进行苏木素复染后，用0.1%盐酸酒精分化，然后自来水冲洗5 min左右。通过不同梯度的酒精进行脱水，二甲苯液体进行透明，最后利用中性树胶进行封片。高年资病理医师阅片并判读确定染色的最终结果，然后讨论并分析JAM-A在不同组种的表达情况及其不同组间的相互关系 1.3结果判定与分析 免疫组织化学染色标记的结果最后由本单位2位副主任医师和外单位病理科2位主任医师分别进行双盲阅片，按照给定的评分标准评分，最终统计4位医师的结果均一致者作为最后的统计结果。免疫组织化学评分标准主要有两种，分别按照阳性强度评分和阳性细胞占所有细胞的比例进行评分。JAM-A蛋白免疫组化染色定位在细胞胞质中着色，免疫组化结果判定按照Sun W等[3]文献中给出的评分方法：（1）根据细胞的染色强度评分：病变区域细胞无染色为 0分；呈淡黄色颗粒染色、明显高于切片组织背景着色评分为 1分；病变组织呈浅棕黄色颗粒时将其结果评分为2分；病变组织中存在大量深棕黄色颗粒时将其免疫组化结果评分为3分；（2）按照阳性细胞数的计数评分：将每张制作的切片不同观察者间随机观察至少10个左右的高倍视野（10个/HPF），计数染色细胞数的阳性百分比例，1%～24%评分为1分；25%～49%评分为2分；50%～75%评分为3分；75%评分为4分。（3）结合以上两个步骤后，将染色强度评分与阳性细胞数比例的评分取其之和，如果总评分相加评分 　　[11] Murakami M，Francavilla C，Torselli I，et al. Inactivationof junctional adhesion molecule-A enhances antitumoral immune response by promoting dendritic cell and T lymphocyte infiltration[J]. Cancer Res， 2010，70（5）：1759-1765 [12] 李殿友，?_毅男，杨红，等. 人参皂甙 Rh2 对细胞间连接黏附分子在小鼠移植瘤淋巴管表达的影响[J]. 解剖学研究，2007，29（1）： 29- 32. [13] Liu C，Wang M，Jiang S，et al. A novel junctional adhesion molecule A（CgJAM-A-L）from oyster（Crassostrea gigas）functions as pattern recognition receptor and opsonin[J].