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复方丹参滴丸对大鼠肝P450 酶系的诱导 作用及其助致癌作用研究 军事医学科学院毒物药物研究所 北京 100850 复方丹参滴丸是我国率先打入国际市场的第一个传统中药；目前已在 FDA进行临床试验。它能显著改善冠脉血流，保护心肌缺血，主要用于治 疗冠状动脉供血不足和心绞痛。国内有一作者用咖啡因作为人肝脏CYP1A2 的探药，发现复方丹参滴丸诱导后人肝脏该酶活性显著增高；亚慢性实验 发现该药能选择性诱导大鼠肝CYP2B1 活性增高，作者认为“该药可能存在 潜在致癌作用，值得注意”[1,2] 。该报道发表后对复方丹参滴丸创造的经济 和社会效益造成了较大的负面影响，引起有关当局和消费者极大的关注。 细胞色素P450 酶系是由多种同功酶组成的超大“家族”，广泛存在于生物体 内，参与生物体内源性和外源性化学物的生物转化。与药物代谢作用有关 的P450 约有30 多种，其中CYP1A1、1A2、2A6 、2B 、2D6 、2E1 、3A4 与 药物或致癌物的代谢活化密切相关[3,4] 。本研究主要有以下两个目的：第一， 观察大鼠经复方丹参滴丸诱导处理后肝细胞色素P450 及CYP1A2、2B1/2 、 2E1 、3A4 亚型活性的变化，以评价复方丹参滴丸对肝脏细胞色素P450 及其 亚型是否有抑制或诱导效应，为指导临床联合用药提供实验依据；第二， 观察复方丹参滴丸诱导处理对原致癌物 2- 乙酰氨基芴(2-AAF)致突变作用 的影响，以阐明复方丹参滴丸是否具有促致突变效应或助致癌作用。 第一部分 复方丹参滴丸诱导处理对大鼠肝细胞色素P450 及其主要亚型的影响 1 材料与方法 1.1 实验动物 雄性Wistar 大鼠，清洁级，200 －250g ，军事医学科学院实验动物中心 提供，合格证号：BDW98012 。动物常规喂养，自由饮水；饲养室光照10h， 黑暗14h，温度21 －25 ℃，湿度30 －70 ％。 1.2 药物及主要试剂来源 复方丹参滴丸由委托方提供。 第 1 页 共 12 页 多氯联苯购于日本西尾工业（株）；地塞米松购于Acros 公司；resorufin 购于 Acros 公司；7-methoxyresorufin 购于 Fluka 公司；7-pentoxyresorufin 购于Sigma 公司；红霉素购于Amresco 公司。 1.3 动物分组及诱导方式 大鼠40 只按体重由计算机随机分为8 组，每组5 只。各组诱导方案如 下： A. 空白对照 B. 多氯联苯(Aroc) ：玉米油溶解，500mg/kg，一次性i.p.，5 天后处死。 C. 苯巴比妥(PB) ：生理盐水溶解，第 1、2 天 60mg/kg/d i.p.；第 3、4 天 80mg/kg/d i.p.，第5 天处死。 D. 地塞米松(Dex) ：玉米油溶解，100mg/kg/d i.p.，连续4 天，第5 天处死。 E. 乙醇(Eth) ：蒸馏水配制，9g/kg/d，分两次灌胃，连续7 天，第8 天处死。 F. 复方丹参滴丸低剂量：125mg/kg/d 灌胃（相当于临床用药剂量的10 倍）， 连续5 天，第6 天处死。 G. 复方丹参滴丸中剂量：750mg/kg/d 灌胃（相当于临床用药剂量的60 倍）， 连续5 天，第6 天处死。 H. 复方丹参滴丸高剂量：4500mg/kg/d 灌胃（相当于临床用药剂量的 360 倍），连续5 天，第6 天处死。 诱导结束后，将大鼠断头处死，去皮，75 ％乙醇消毒后，无菌条件下 取出肝脏，称重，以0.15MKCl-0.2M 蔗糖为匀浆介质，按 1:3 的比例在冰 浴中制成肝匀浆，4 ℃下9000g 离心20min ，上清为S9。取一部分S9 经干 冰速冻后，于－70℃保存，用于Ames 试验。剩余上清4 ℃下105000g 离心 60min 制备微粒体，0.05MTris-0.25M 蔗糖(pH 7.6)混悬，干冰速冻后－70℃ 保存。 1.4 测定方法 用Lowry基本法进行微粒体蛋白定量[5] ，P450 含量用CO吹泡法在450nm 和 490nm 差示光谱测定[6] ；CYP1A2