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短芽孢杆菌的转化方法
25 4 ( ) Vol. 25 No . 4
2004 12 Journal of Jishou University ( Natural Science Edit ion) Dec. 2004
1007- 2985( 2004) 04- 0035 - 04
1 1 2 2
彭清忠, 彭清静 , 张惟材, 朱厚础
( 1. , 4 16000; 2 . , 100071)
采用Tris- PEG 法电击转化法和TSS 方法对5 株野生短芽孢杆菌进行了转化. 中, Tris- PEG 法转化短芽孢
杆菌50 和735 , 电击转化短芽孢杆菌50 取得成功, 转化率为102 个转化子/ g DNA.
短芽孢杆菌; Tris- PEG 法; 电击转化法
Q753 B
;
, ; , .
, , ,
[ 1]
, ; ,
[ 2]
, . ( B acillus brevis) ,
[ 3, 4]
, . .
[ 5]
5 ,
[ 6]
. , .
Tris- PEG TSS 5 . , 2
.
1
1. 1
[ 5]
50, 268, 413, 618 735 , pBKE50
[ 6]
.
T 2 LB [ 5] .
Tris- PEG MTP 20 mL ( 0. 1 mol/ L, pH 6. 5) , 10 mL
( 7% K HPO + 2. 5% KH PO ) , 18 mL H O, 2 mL MgCl ( 1 mol/ L) , 50 mL T ; 40% PEG ( )
2 4 2 4 2 2 2
20 mL ( 0. 1 mol/ L, pH 6. 5) 40 g PEG6000, 100 mL ; 50 mmol/ L
Tris- HCl ( pH 7. 5) 50 mmol/ L Tris- HCl ( pH 8. 5) .
, 1 mmol/ L Hepes( pH 7. 0) ; HG, 1 mmol/ L Hepes ( pH 7.
0) , 10% .TSS [ 7] .
1. 2
( 1) Tris - PEG , 5 mL T2 , 37 ;
50 L 5 mL T2 , 37 4~ 5 h( ) , 4 000 g
2004 - 10- 15
( 03B03 1)
( 1970- ) , , , , , .
36 ( ) 25
5 min ; 5 mL 50 mmol/ L Tris - HCl ( pH 7. 5) , 5 mL 50 mmol/ L Tris - HCl
( pH 8. 5) , 37 30~ 60 min ; 4 000 g 5 min , 1 mL MTP
, 0. 5 mL MTP ; D
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