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抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性影响 　　【摘要】 目的：探讨抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞侵袭性降低的作用及其与PI3K/PKB信号传导通路之间的关系。方法：MTT法检测抗胶质瘤Ⅰ号处理培养的C6胶质瘤细胞的抑制率，免疫印迹法检测肿瘤细胞内PI3K和PKB表达水平，最后，利用结晶紫染色法检测Transwell下室面的胶质瘤细胞数。结果：抗胶质瘤Ⅰ号可以抑制PI3K和PKB蛋白表达水平，抗胶质瘤Ⅰ号作用0.5 h时PI3K蛋白表达水平最低为（25.1±3.1），作用1 h时PKB蛋白表达水平最低为（25.1±3.8），与对照组的（99.1±1.6）、（91.2±3.5）比较，差异均有统计学意义（P 　　1 材料与方法 1.1 材料与试剂 （1）C6大鼠脑胶质瘤细胞株由中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心提供。（2）主要试剂羊抗大鼠PI3K和PKB购自英国Abcam公司，小鼠抗大鼠β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司。抗胶质瘤Ⅰ号组成成分包括鸦胆子口服液、白花蛇草、蜈蚣、水蛭、枸杞子、土茯苓、猪苓、葛根 1.2 方法 1.2.1 胶质瘤细胞培养 胶质瘤细胞采用F-12培养基培养进行培养，培养基内加入2.5%胎牛血清和15%马血清，37 ℃孵箱内孵育，并通以5%的CO2。细胞生长至对数生长期后，随机分为实验组和对照组。实验组为抗胶质瘤Ⅰ号作用0.1、0.5、1、2、3、4 h 六个时间点，对照组在相应的时间点加入等量生理盐水，每组选10个标本 1.2.2 免疫印迹法检测胶质瘤细胞内的PI3K和PKB蛋白表达水平 培养的胶质瘤细胞给予抗胶质瘤Ⅰ号后，收集不同时间点（0.1、0.5、1、2、3、4 h）的胶质瘤细胞，细胞进行裂解、超声破碎后，低温离心并收集上清液，采用7.5%的SDS进行电泳，每个泳道样本的加样量为30 μg。半干转印结束后用脱脂奶粉封闭1 h后并4 ℃过夜。次日取出NC膜分别加入PI3K和PKB的一抗震荡孵育2 h。TTBS洗后行二抗震荡孵育1 h。TTBS洗后的NC膜采用增强化学发光检测，结果用IDV值进行分析 1.2.3 抗胶质瘤Ⅰ号对肿瘤细胞增殖的影响 培养的胶质瘤接种于96孔板，密度调整为1×104个细胞/孔，细胞增殖至对数生长期24 h后，细胞培养液内加入抗胶质瘤Ⅰ号，对照组加入不含血清的培养基。MTT染色法检测抗胶质瘤Ⅰ号作用后不同时间点的胶质瘤细胞增殖抑制率 1.2.4 结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性 Transwell膜上室接种胶质瘤细胞，密度为5×104个/膜，培养24 h后，分别于抗胶质瘤Ⅰ号作用后不同时间点用测定Tanswell膜下室面的贴壁细胞数目 1.3 统计学处理 采用SPSS 11.5软件进行统计学处理，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P 　　近年来，关于中草药及其活性成分抗胶质瘤作用的研究已经证实，人参皂甙、紫杉醇、氧化砷、苦参碱、榄香烯、丹参酮等多种中药以及合剂对抗胶质瘤的作用机制主要包括：影响胶质瘤细胞周期；抑制癌发生相关基因的表达；调节机体免疫功能；抑制肿瘤血管生长；诱导肿瘤细胞分化；调节肿瘤细胞信号传导；抑制端粒酶活性和细胞毒作用等[16-18]。中药诱导胶质瘤细胞凋亡是通过多靶点、多途径、多环节来实现的 笔者通过研究抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞侵袭性、细胞增殖情况，发现抗胶质瘤Ⅰ号方剂可以降低胶质瘤细胞侵袭性，并于抗胶质瘤Ⅰ号作用3 h时最为明显。而抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞增殖的抑制作用亦于作用3 h时达最高水平。说明抗胶质瘤Ⅰ号可抑制胶质瘤细胞增殖，降低胶质瘤侵袭性 有研究发现，PI3K/PKB信号通路在机体生命活动过程中的很多方面发挥着重要作用，且常常可被多种肿瘤所激活[19-20]，与肿瘤的发生、发展、转移、耐药性等密切相关[21]。PKB是PI3K的一个重要下游信号分子，可促进细胞恶性转化 本研究发现，抗胶质瘤Ⅰ号可以降低PI3K信号蛋白的表达，并于抗胶质瘤Ⅰ号作用后的0.5 h时达最低水平，而信号蛋白PKB则在抗胶质瘤Ⅰ号作用后1 h时达最低表达，据此推测，抗胶质瘤Ⅰ号作用于胶质瘤细胞后，可能是通过降低PI3K的表达而激活了其下游的信号分子PKB，通过此信号通路的激活最终引起胶质瘤细胞增殖受抑降低了胶质瘤的侵袭性 有关抗胶质瘤Ⅰ号降低胶质瘤侵袭性的作用，可能还有其他的信号通路或信号蛋白分子参与其中，亦可能是调动了机体某些内在机制而实现的，这些尚待进一步研究 参考文献 [1] Zhao M，Xu H，Liang F，et al.Association of osteopontin expression with the prognosis o