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1绪论
1.1 茶多糖的结构与功能
茶多糖是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质,是一种酸性糖蛋白,并结合有大量的矿质元素,称为茶叶多糖复合物简称为茶叶多糖或茶多糖Tea Polysaccharide)。其是蛋白部分主要由约20种常见的氨基酸组成糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等,矿质元素主要由钙、镁、铁、锰等及少量的微量元素,如稀土元素等组成。
0.85% ±0.10% ,绿茶为1.41% ±0.06% ,但该研究是以葡萄糖作标准曲线,而实际上如王丁剐[3]、汪东风[4]等报道,茶多糖是由阿拉伯糖、核糖、木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等组成的杂多糖,其具体的单糖组成与茶叶的品种有关。而不同的单糖与蒽酮—硫酸试剂显色情况不同,不同单糖标准曲线的斜率不同,因而仅采用葡萄糖做标准的测定结果,会存在一定的误差,结果比实际含量偏低。
1.3 本文研究内容
本文用精制茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子,然后将经前处理除杂后的茶样用水提取,蒽酮一硫酸法比色测定,对江西婺源不同茶场茶叶中多糖的含量进行了测定,并与其它产地、品种的茶叶进行了比较。
2 实验部分
2.1 实验仪器与材料
2.1.1 实验仪器
分光光度计,电子天平,水浴锅,旋转蒸发仪,真空干燥箱,离心沉淀机;
2.1.2 实验试剂
蒽酮、浓硫酸、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇,以上试剂均为分析纯;
2.1.3 实验原料
江西婺源红碎茶、绿茶、分宜绿茶、福建安澳乌龙茶。
2.2 实验方法
2.2.1 实验原理
选用精致茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子,然后将经前处理后的茶样用水提取,蒽酮—硫酸法比色测定,对不同茶场茶叶中多糖的含量进行测定。
2.2.2 茶叶多糖的提取与精制[5、6]
称取已干燥的40目茶叶粉末20g,置索氏提取器中,加入石油醚(沸程60oC一90oC)lOOml,90oC 回流提取1h脱脂,抽滤,滤渣挥干溶剂后.加80%乙醇200ml,90oC水浴回流lh,重复提1次,双层滤布过滤,滤渣加400ml蒸馏水,沸水浴回流提取1h,间歇搅拌。双层滤布过滤,滤渣加200ml蒸馏水,沸水浴再回流提取1 h,间歇搅拌,过滤,合并两次滤液,离心分离(400Or/min,10min),真空浓缩(60oC ,50r/min,真空度0. 095Mpa)至20ml,Sevage法除蛋白,反复进行三次至无蛋白层,然后用流动自来水透析48h,蒸馏水透析24h,透析液中加人无水乙醇使乙醇浓度达80% ,于4oC冰箱中过夜醇沉,再离心分离(400Or/min,10min),沉淀依次用无水乙醇 丙酮、乙醚各洗两次,真空干燥(45oC,0.095Mpa)至恒重,即得精制茶多糖。称重,计算得率,备用。
2.2.3 标准曲线的绘制[7、8]
2.2.3.1 标准溶液的配制
精密称取105oC干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2508g,置于250ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,配成1.O03mg/ml的标准溶液,然后分别提取2.5ml、5ml、lOml、15ml、20ml标准溶液,置于100ml容量瓶中稀释至刻度,摇匀,配成系列标准溶液。
2.2.3.2 蒽酮一硫酸试液的配制
称取0.33g蒽酮,加100ml浓硫酸,置于棕色瓶中,混合摇匀置于冰箱中(现配现用)。
2.2.3.3 吸光度的测定
分别准确移取lml系列标准溶液于具塞试管中.以lml蒸馏水作空白,每管再加入4ml蒽酮—硫酸试液,立即摇匀,置于冰水浴中,然后一起置于沸水浴中加热7min.之后用流动自来水迅速冷至室温,放置10min后,于62Onm处测定吸光度。以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理,得回归方程:C=-0.00253+0.317A,r=0.9993。
2.2.4 换算因子的测定
精密称取45oC真空干燥至恒重的精制茶多糖10mg,置于25m1容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,90oC水浴加热.超声1min增溶.摇匀,制得茶多糖贮备液.蒽酮一硫酸比色法测定其吸光度(A),由回归方程求出此精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度,测得其葡萄糖含量,按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后溶解性降低.故按2.2.2中的方法制得多糖透析液后取等量10ml透析液两份.经醇沉洗涤后,一份直接加蒸馏水溶解(复水性好),定容,比色,测定多糖含量, 另一份真空干燥至恒重,称得精制茶多糖的干重,由二者计算平均换算因子。
换算因子f=W/(C·D) (1—1)
式中:W为称取多糖的重量(mg),C为精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度(mg/m1),D为多糖的稀释因素。再按上法测定婺源红碎茶、分宜绿茶、福建安溪乌龙茶的换算因子f。
2.2.5 样品中茶多糖含量测定
2.2.5.1 样品溶液的制备
精密称取40目茶粉1g,加80
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