品红亚硫酸钠培养基.docVIP

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  编号:022150   中文名称: 品红亚硫酸钠培养基(远藤琼脂培养基)   英文名称:Endo Agar   用 途:   用于水中大肠菌群的分离或确证试验。 (GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。   原 理: 乳糖发酵的细菌产生乙醛,在存在碱性品红的情况下乙醛与亚硫酸钠结合形成红色菌落,快速发酵乳糖的细菌产生金属光泽,不发酵乳糖的细菌形成无色透明的菌落。蛋白胨、酵母膏粉、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和矿物质;乳糖为可发酵的糖类;琼脂是培养基的凝固剂;磷酸氢二钾为缓冲剂;亚硫酸钠能将碱性品红还原,使其褪色,发酵乳糖的细菌产生乙醛,与亚硫酸钠和碱性品红生成红色菌落。  配方(每升):   蛋白胨10g   酵母膏粉5g   牛肉膏粉5g   乳糖10g   琼脂15g   磷酸氢二钾3.5g   无水亚硫酸钠5g   碱性品红 1g   最终pH 7.2±0.2   使用方法:   1、 称取本品54.5g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,115℃高压灭菌20min,冷至50℃左右,倾注无菌平皿,备用。   2、 滤膜灭菌:将孔径为0.45μm的滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水或去离子水,置于沸水浴中煮沸灭菌三次,每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2-3次,以除去残留溶剂。   3、 滤器灭菌:用点燃的酒精棉球,火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。   4、 过滤水样:用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,将100mL水样(如水样含菌较多,可减少过滤水样量,或将水样稀释)注入滤器中,打开滤器阀门,负0.5大气压下抽滤。   5、 培养:水样抽滤完后,再抽气约5S,关上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放在品红亚硫酸钠培养基上,滤膜截留面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入36±1℃恒温箱内培养22-24h。   6、 观察结果:挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。   紫红色,具有金属光泽的菌落。   深红色,不带或略带金属光泽的菌落。   淡红色,中心色较深的菌落。   质量控制:   本培养基倾注平皿待冷却后呈浅红色。质控菌株接种后。36±1℃培养22—24h, 观察结果如下表:   菌 名       菌 号     生长状况    菌落特征   大肠埃希氏菌  ATCC25922     良好    红色,有金属光泽   鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115   良好    无色至淡粉红色   金黄色葡萄球菌 ATCC6538      不长或差     ——   贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。   规格:250g

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