果蔬中还原糖和总糖的测定.docVIP

果蔬中总糖及还原糖含量的测定 实验目的 1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 2、学习分光光度计的原理和操作方法。 3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理 4.0 4.0 4.0 4.0 煮沸10min，冷却后室温放置10min，在620nm处比色 A620nm 20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100mL。 四、实验操作 葡萄糖标准曲线的绘制： 取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按下表加入各试剂 以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。 2、样品中还原糖的提取和测定 称取1g梨，加蒸馏水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温约30min（使还原糖浸出），取出置于离心管内，5000r/min离心10min，冷却后定容至100mL。 吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 3、样品中总糖的提取、水解和测定 称取1g梨，加蒸馏水水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解30min，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性，取出置于离心管内，5000r/min离心10min，然后用蒸馏水定容至100mL。 吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 六、计算 按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）。 W(还原糖)= W(总糖)= （乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。） 其中： W（还原糖）：还原糖质量分数（%） W（总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL） C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL） V2：样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量 实验思考 1、应用蒽酮法测得的可溶性糖包括哪些？ 2、干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？ 3、了解可溶性糖含量在植物生理研究和实际上有什么意义？