第07章6细胞、组织和肿瘤动力学ok.ppt

第7章 细胞、组织和肿瘤动力学 生物医学工程学院 作业： 1. 什么是百分标记有丝分裂技术？在体外和体内如何操作？ 2. 细胞丢失途径。 教学要求 教学目标 了解：细胞生长比例，细胞丢失概念和途径。 掌握：细胞增殖周期，人体肿瘤的生长动力学，实体瘤和其对应正常组织细胞固期时间的比较。 应用：实验肿瘤内测定细胞丢失，为实际治疗提供依据。 本章重点 1.细胞周期组成部分的定量评估。 2.人体肿瘤的生长动力学。 第7章 细胞、组织和肿瘤动力学 7.1 细胞增殖周期 7.2 生长比例 7.3 细胞丢失 7.4 肿瘤生长的全貌 第7章 细胞、组织和肿瘤动力学 7.1 细胞增殖周期 用普通显微镜观察，只能见到有丝分裂的过程 在细胞周期的大部分时间内，染色体分散于细胞内，无法观察到。 细胞周期：两次有丝分裂之间的时间 第7章 细胞、组织和肿瘤动力学 7.1 细胞增殖周期 脉冲标记：使细胞与一定量的3H标记的胸腺嘧啶或溴脱氧尿嘧啶接触一段时间。 该标记的DNA前期化合物在细胞进入S期时通过DNA复制被结合进DNA。 该3H标记的胸腺嘧啶可用放射自显影辨别。 3H标记的溴脱氧尿嘧啶可用特殊染色或特定抗体辨认。 7.1 细胞增殖周期 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 7.1.2 潜在倍增时间 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 有丝分裂指数（mitotic index, MI指数） 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 标记指数（labeling index, LI指数） 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 1. 百分标记有丝分裂细胞技术（PLM） 最易标记的时相是：S期 最易观察的是：M期 PLM标记技术： 将处于S期的细胞群标记上核素， 并观察这些被标记的细胞在细胞周期中从S期向M期运动中在M期的出现时间 技术特点： 费时费事 需要大量的系列样本 观察离体细胞方便 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 1. 百分标记有丝分裂细胞技术（PLM） 观察离体细胞 （1）用3H标记的胸腺嘧啶加入细胞培养液内； 理论上必须在很短的时间内供应足够量的被标记细胞 实践中一般用20分钟进行标记 （2）带脉冲标记时间结束后，弃去有放射性的培养液，加入新鲜培养液 在体实验 （1）腹腔注射将3H标记的胸腺嘧啶导入体内； （2）20分钟后用腹腔注射大量的“冷”胸腺嘧啶 清除3H标记的胸腺嘧啶 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 1. 百分标记有丝分裂细胞技术（PLM） 体内 3H胸腺嘧啶作用的S相的细胞将放射活性结合进细胞内； 标记结束后，细胞在周期内前进 定期取材： 将标本固定、染色并准备自显影。 对每个样本中有放射性标记的有丝分裂细胞百分比进行计数（标记的有丝分裂百分比） LM：标记的有丝分裂相 UM：未标记的有丝分裂相 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 1. 百分标记有丝分裂细胞技术（PLM） LM：标记的有丝分裂相 UM：未标记的有丝分裂相 只有1%-2%的细胞处于分裂状态 其中只有部分被标记上 理想细胞群体： 细胞周期一致； 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 理想细胞群体： 细胞周期一致； 细胞群处于S期时，刚好被标记上（标志细胞群）； 标记结束后，细胞周期继续前进； 开始几个小时内取的材料没有被标记的有丝分裂相； 标志细胞群到M期时，出现被标记的有丝分裂相（b）； M期末期，有丝分裂细胞数最多（所有）（c）； 有丝分裂过程（c-d）； 有丝分裂完毕，标记细胞数很快下降为零（d-e）。 第7章 细胞、组织和肿瘤动力学 7.1 细胞增殖周期 7.1.1 细胞周期的组成部分的定量评估 2. 离体和在体实验性细胞周期时间的测定 结论： 缺乏第二峰，则细胞周期时间范围很宽 恶性细胞有较短的周期时间 G2、M和S时相相对固定 G1时相差异决定了细胞周期的差异 7.1.2 潜在倍增时间 方法：流式细胞仪（flow cytometer;FCM） 将流体喷射技术、激光技术、空气技术、γ射线能谱术及电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的一种非常先进的检测仪器。 通过测量细胞及其他生物颗粒的散射光和标记荧光强度，来快速分析颗粒的物理或化学性质，并可以对细胞进行分类收集，可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个细胞特征参数，进行定性或定量分析，具有速度快、精度高、准确性好等特点。 多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器 它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标 而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少 也就是说，它的细节 分辨率为零 7.1.2 潜在倍增时间 方法：流式细胞仪（flow cytometer;FCM） 流式细胞仪主要由四部分组成。 流动室和液流系统 激光源和光学系统 光电管和检测系统