巴氏杜氏藻番茄红素β-环化酶基因的克隆和其启动子的活性分析.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2013, Vol.29, No.7 巴氏杜氏藻番茄红素β-环化酶基因的克隆 及其启动子的活性分析 1 2 3 姜建国 ，陆燕 ，劳永民 （1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510006）（2.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006） 摘要：杜氏盐藻是迄今为止工业化生产β- 胡萝卜素最成功的经济微藻之一，番茄红素β-环化酶（LycB ）是催化番茄红素合成β- 胡萝卜素的关键酶。本研究根据实验室克隆得到的LycB 的cDNA 序列，通过分析其保守序列设计引物，通过分段克隆PCR 及基因 组步移的方法，克隆获得几乎完整的LycB 基因组序列。测序结果表明，克隆到的该部分LycB 基因组序列含有5863 bp ，由11个外 显子和10个内含子组成。再通过基因组步移的方法，获得LycB 基因启动子和终止子序列。其中，5’端上游序列长度为2566 bp ，3’ 端下游序列长度为818 bp。采用PlantPAN 在线启动子预测工具进行分析，结果表明，该基因启动子含有一些顺式作用元件如光响应 元件、盐响应元件等，表明巴氏杜氏藻LycB 基因的表达可能受到光照及盐浓度等因素的调控。 关键词：巴氏杜氏藻；番茄红素β-环化酶 （LycB ）基因；启动子；终止子 文章篇号：1673-9078(2013)7-1496-1500 Cloning of Lycopene β-Cyclase Gene and Activity Analysis of its Promoter from Dunaliella bardawil 1 2 3 JIANG Jian-guo , LU Yan , LAO Yong-min ( 1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 5 10006, China) (2.School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) Abstract: The unicellular green alga Dunaliella bardawil has been successfully used for natural production of β-carotene. Lycopene β-cyclase (LycB) is one of the key enzymes for the synthesis of β-carotene, which can catalysis lycopene to form β-carotene. In this research, based on the full-length sequence of LycB cDNA of D. bardawil previously coloned by our group , primers were designed and genomic sequence of LycB were isolated by analysis of the conserved region of LycB gene from other species in database and by using the approach of PCR with genome walking techniques. Sequence results showed that nea