GTC程序.doc

GTC实验室工作程序       Updated by Susan 2003/11/22 5 1打开电源 打开水浴锅,光密度仪,采精杯预热橱,电子称和显微镜的电源开关。 2摇匀贮精 将贮存在精液保温箱中的精液袋轻柔摇动,使之悬浮均匀。（早晚各一次） 清点并记录储存精液的种类和数目。 同时检查并注意保持精液贮存箱的温度在17℃。 3检查贮精质量 用移液器吸取待检精液,置于载玻片上在恒温加热台（调至37℃）预热3分钟。 在400×显微镜下评估贮存精子质量,活力不得低于60%；形态异常率不得高于15%。判定使用与否,并作记录。 4配制稀释液 根据当日精液稀释配制计划,称取一定量的蒸馏水,放入37℃的水浴锅中预热。（每头次输精剂量 为85-95ｍｌ）。 将稀释剂按1:1（一袋稀释剂对应一升水）与蒸馏水充分混匀,放入37℃的水浴锅中加热。注:稀释液应在配制好30分钟至24小时之间使用。 5采精前准备 制备采精杯,放入预热橱。 预热载玻片和盖玻片到37℃；预热稀释液到37℃;将光密度仪调至待读样状态。 查看“公猪使用记录表”,结合配种计划要求确定可使用的公猪及需稀释的头份。 注:公猪每周需采精一次，但不得多于两次；纯种繁育需查看公母猪的系谱,防止近交。 ６采精 准备温水和干毛巾。 根据公猪的体高,将假台畜调至适当高度。 将采精公猪赶入采精栏。 用温水洗净公猪的下身,并用毛巾擦干。 将手洗净擦干,戴上采精专用手套。 诱使公猪爬上假台畜。 待其将尿液和包皮积液排净后,用手握成空拳导入阴茎,让其抽动数次后用手 锁住阴茎头顺势拉出。 待其射精后,弃掉开始部分的胶体和清亮的副性腺液，收集富含精子的部分。  注：公猪射精时间一般为５－１５分钟,在其没有结束射精时不要放开采精的手。 8精液稀释 计算可稀释头份＝［体积（ml）×浓度（106/ ml）×精子活率％］÷4 根据计划稀释头份,计算稀释液用量和精液需要量,并在电子称上称取所需体积的稀释液。　（每份分装体积为85-95ｍｌ） 调整稀释液温度,使其与原精温度相差不超过±1℃。 将所需体积的精液与稀释液混合均匀。 镜检稀释后的精子活力不得低于60％；精子形态异常率不得高于15%，否则不可用。 　　　　　　　 　　　　　　　　　 7原精处理 采精后去掉罩在采精杯上的滤纸和粘液，注意避免杂物掉入精液。 插入干净的温度计测量精液温度,作记录。 100×显微镜下镜检精子活力评分不得低于2,否则弃之不用。 用移液枪吸取定量的原精完全注入已用定量参比液调零的比色杯中并混匀。 测得的OD值通过专用的“OD值与密度值转换表”查到精子密度,作记录。 电子称上称量精液的净重（1克≈1毫升）,得到所采精液的体积,作记录。  注：鲜精镜检应在精液采后的10-15分钟内进行,并注意避免日光直射精液。 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　 ９包装及贮存 用吸耳球将稀释的精液吸入虹吸导管,并弃掉开始部分液体。 分装需缓慢进行,并注意检查注入精液袋的精液量和封口质量。 贴好写有公猪耳号和采精日期的标签。 分装好的精液待其逐步冷却至室温后,放入17℃精液专用保温箱中贮存。 10工作记录 填写“公猪使用记录表”和“公猪使用记录卡”。 填写“采精记录表”，内容包括：采精日期、采精者姓名、公猪耳号、收集类型（全部或部分）、采精量、精液质量和备注（公猪健康状况和性欲等）。 　　　　　　　 11设备仪器清洗及保养 及时清洗精液配制过程中使用的用具和仪器,并用蒸馏水过滤;将废液、废物及时处理，注意避免清洗剂与精液配制用具的接触。 注意保持实验室的干燥和卫生。  PIC中国技术部