AES显色培养基.ppt

* 新型食源性致病菌检测 显色培养基 华粤行仪器有限公司 邹黎明 传统培养基方法 微生物分析的主要方法 原理: 糖发酵 Ex: 乳糖发酵用于大肠菌群检测 氧化还原 Ex: 如H2S基础培养基用于Salmonella spp. 缺点: 大部分生化反应只是用于检测微生物种群(属). 需要转代 浪费金钱和时间 : 大部分需要确认实验 传统培养基方法 显色及荧光底物技术 显色及荧光底物: 由化学及合成技术获得 特殊酶天然裂解成相似结构的分子 酶裂解时释放发色及荧光混合物 专一性酶活性，目视观察 应用: 鉴定板 快速酶测试 接加至培养基中(固体和液体) 减少和降低确认测试量 显色及荧光底物技术 底物结构 共价键 (糖苷的, 肽聚, 磷酸二氢聚 …) 由酶进行专一性识别 糖类 脂类 蛋白胨 色 原 底 物 结 构 共价键结合 专一酶 糖类 脂类 蛋白胨 色原 非裂解底物: 不显色 糖类 脂类 蛋白胨 色源 游离或二聚物 可显色 ALOA? : L.monocytogenes detection and enumeration in food samples 食品中单增李斯特菌检测 CHROMOGENIC CULTURE MEDIA NEW APPLICATIONS ASAP ? : Salmonella detection in food, veterinary and clinical samples 食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测 ESIA? : Enterobacter sakazakii detection in dehydrated food and environmental samples脱水食品及环境样品中阪崎肠杆菌检测 ALOA ? Agar Listeria acc. Ottaviani Agosti Chromogenic medium 单增李斯特菌检测和计数培养基 ALOA ? 原理: Beta-glucosidase activity Blue colonies Β-葡萄糖苷酶活性，蓝色 Phospholipase activity Opaque halo 磷酸酶活性，混浊晕 Listeria spp. Listeria monocytogenes Aloa 单增李斯特菌的选择性 Palcam Oxford Listeria innocua Listeria monocytogenes 相同的菌落 L. m Listeria monocytogenes 可非常清晰地分辨单增李斯特菌 L. i 混合李斯特氏菌存在的问题 单增李斯特菌和其它无毒李斯特菌在LEB培养基中生长对比 (Mac Donald and coll. - 1996) 种类 繁殖一代的时间 总代数. (24H - LEB) L.mono 70 min 21 L.innoc 55 min 26 例如: 在225mL增菌培养基中各有1 个细胞 24小时增菌后 - 在 5 μl (在 PAL/OXF上的接种量) : 5 个 L.mono(单增李斯特氏菌) 和 150 个 L.innocua(无毒李斯特菌) 混合李斯特氏菌存在的问题 假如随机挑取5个菌落确认，在X个无毒李斯特菌中 有1个单增李斯特菌，被检出的可能性如下： 可能性 66% 1/4 15% 5% X = ratio L.i/L.m 4 19 29 99 ALOA One Day alternative method : 分析方法图 25 g 食品样品 + 225 ml HALF FRASER BROTH ? 24 H / 30°C 涂布 0.1 ml on ALOA ? 24 H / 37°C ? ? 存在典型菌落 : 不存在典型菌落 : 确认* 不存在单增李斯特氏菌 * : 糖 /溶血试验 ALOA ? 认证 AFNOR validation (ALOA ONE DAY METHOD - Fr