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微生物实验问题与答案 一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？ 答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。 2、数值口径的表达公式？ 答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系？ 答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。 4、油镜的使用与普通物镜有何不同？ 答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。 5、使用油镜时应特别注意什么？ 答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。 二、微生物染色 1、单染色的原理是什么？ 答案：主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。 2、单染色过程中，为什么干燥固定？ 答案：因为通过干燥可以使菌体蛋白变性，细胞质凝固，进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。 3、单染色过程中，为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下？ 答案：因为如果水流直接冲洗有菌部位，容易使菌体被冲洗掉。 4、为什么载玻片要完全干燥后，才能使用油镜？ 答案：因为香柏油与水不相溶，容易造成光线发生折射或散射，一方面无法构成油镜，另一方面也会降低视野的亮度。 5、革兰氏染色的原理是什么？ 答案：对于G+细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量高，网孔小，再加上脂量低，所以乙醇脱色后，进一步地缩小了网孔，结晶紫-碘复合物无法脱出，第二次用番红染色时无法着色，进而呈紫色；对于G-细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量低，网孔大，再加上脂量高，所以乙醇脱色后，进一步地扩大了网孔，结晶紫-碘复合物被脱出，第二次用番红染色时着色，进而呈红色。 6、革兰氏染色时，为什么要加碘液？ 答案：碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物，从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透；另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。 7、革兰氏染色时，为什么要用酒精冲洗？ 答案：加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。 8、革兰氏染色时，为什么不能涂片太厚？ 答案：涂片太厚，容易使菌体重叠，造成假阳性。 9、革兰氏染色时，为什么说脱色是最关键的一步？ 答案：如果脱色时间较短，则容易使革兰氏阴性细菌脱色不完全，造成假阳性；如果脱色时间较长，则容易使革兰氏阳性细菌内的染料被脱出，造成假阴性。 10、革兰氏染色时，如何证明你的染色操作是正确的？ 答案：将革兰氏阳性细菌—葡萄球菌与革兰氏阴性细菌--大肠杆菌制成混合涂片，经革兰氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大肠杆菌呈红色，则说明染色操作是正确的。 三、无菌操作（补充） 1、无菌操作过程中，为什么试管或三角烧瓶在开塞或回塞之前，口部要过火几次？ 答案：这样可以烧去管口或瓶口的微生物。 2、开塞后的试管或三角烧瓶口部微生物要平放？ 答案：如果口部向上或朝下，则容易通过空气对流污染培养物。 3、接种针接种前后微什么要过火焚烧？ 答案：主要防止微生物培养物之间交叉污染，也防止污染操作台面。 四、细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察细菌的鞭毛染色细菌的鞭毛用新培养的并且转接2-3次的菌种为易载玻片。悬滴法悬滴法观察细菌运动取干净的凹玻片与盖玻片个一块，并在盖玻片的四角涂少许凡士林。加一滴变形杆菌菌液于盖玻片中央，并轻轻翻转，使菌滴直对凹玻片凹陷处，轻压于凹玻片上。镜检，观察细菌的运动情况。细菌的芽孢染色与夹膜染色由于芽孢壁厚，不易着色，所以需加热，以便染料进入菌体荚膜主要成分是多糖，很难着色，因而只能采用衬托的方法将背景与菌体染色，而衬托出白色而透明的荚膜。取干净的普通载玻片，并在载玻片的一端滴加蒸馏水，将巨大芽孢杆菌轻沾于水滴中。加少许墨汁于菌滴中，加盖玻片，轻轻挤压，除去多余的液体。镜检，可以观察到菌体周围的白色荚膜。 pH、渗透压、水活度和氧化还原电位；经济。 2、培养基配制应注意什么？ 答案：称取药品蛋白胨时要迅速，防止吸潮；培养基融化时要不断搅拌以防烧焦；针对不同的培养基要调节适当的pH；培养基灭菌时应按高压蒸汽灭菌锅的操作过程进行，以免危险发生。灭菌后培养基要及时处理，防止凝固或污染。 3、为什么培养微生物时，平板培养基要倒置？ 答案：第一培养基倒置可以防止冷凝水落到培养基表面，使菌落分散开；第二可以防止空气对流，污染培养基。 4、为什么高压蒸汽灭菌效果好？ 答案：因为在湿热情况下，湿热的穿透力强，菌体吸收水分使蛋白质容易凝固，而且当蒸汽与菌体接触后冷凝成