紫外分光光度计的应用.ppt

紫外分光光度计的应用 分光光度法的特点 1.灵敏度高 2.准确度高 3.适用范围广 4.操作简便快速、应用范围广 吸收光谱的分类 远紫外线 波长范围：10~200nm 分析方法：真空紫外光度法 近紫外线 波长范围：200~380nm 分析方法：紫外光度法 可见线 波长范围：380~780nm 分析方法：比色及可见光度法 吸收光谱的分类 近红外线 波长范围：0.78~2.5um 分析方法：近红外光谱法 中红外线 波长范围：2.5~5.0um 分析方法：中红外光谱法 远红外线线 波长范围：5.0~1000um 分析方法：远红外光谱法 溶液颜色与光吸收的关系 互补色 两种颜色的光按适当强度比例混合时，可以形成白光，这两种色光就称为互补色。 黄 绿 青 \ | / 橙—— 白光 ——青蓝 / | \ 红 紫红 蓝 溶液颜色与光吸收的关系 白光通过溶液时，溶液没有吸收的，该溶液呈无色透明状。 白光通过溶液时，溶液全部吸收的，该溶液呈黑色。 白光通过溶液时，溶液选择性吸收的，该溶液呈现被吸收波长光的互补色。 如：KMnO4溶液，吸绿色而呈紫红色 光的吸收曲线 将不同波长的光通过一定浓度和厚度的有色溶液，分别测出它们对各种波长的吸光度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标画出曲线，称为光的吸收曲线。 光吸收程度最大处的波长称为最大吸收波长。 光的吸收定律 朗伯-比耳定律 光的吸收与溶液的厚度与溶液的浓度成正比。 A=kbc A-吸光度 b-溶液的厚度 c-溶液的浓度 k-比吸收系数 光的吸收定律 透光率 透光率用T表示 透光率的到数的对数为吸光度 A=lg1/T 比吸收系数含义 入射波长一定时，溶液浓度1%，液层厚度为1cm时的吸光度。 光的吸收定律的适用范围 各种有色的均匀溶液，一定的浓度范围。 超过一定的浓度范围，曲线会发生正偏离或负偏离。 偏离的原因 1.入射光非单色光 2.溶液中的化学反应 3.比耳定律的局限性 溶液浓度小于0.01mol/L的稀溶液 目视比色法 工作原理 朗伯-比耳定律 : A=kbc 其中A、k、b相同，c必定相同。 优点 1.仪器简单，操作简便 2.液层较厚，灵敏度较高 3.在特定条件下，不符合朗伯-比耳定律的溶液，仍可测定。 缺点 准确度较差 紫外可见分光光度计 主要部件 光源、单色器、吸收池、检测器、测量系统 部分性能 721分光光度计 波长范围360~800nm 玻璃棱镜 读数方式：指针式 754分光光度计 波长范围200~800nm 光栅 读数方式：指针式 紫外可见分光光度计 Cary-50分光光度计 波长范围190~1100nm 光栅 读数方式：微机 具有扫描功能 分光光度计的检验与维护 分光光度计的检定周期: 一年 环境要求 1.室温应保持在15~28℃。 2.相对湿度应在45~65%,不应超过75%。 3.防尘、防震、防电磁干扰。 4.防腐蚀。 分光光度计的检验与维护 保养和维护方法 1.不用时不要开光源灯。 2.不要拆开单色器，单色器是仪器的核心部分。 3.吸收池用后，立即洗净，防止擦伤。 4.光电器件应避免强光照射和受潮积尘。 5.仪器的工作电压应保持在220v±10%，必要时配备温压器。 分光光度法 分光光度法两种形式 利用物质本身对紫外或可见光的的吸收进行测定 生成有色化合物即“显色”以后测定 显色反应 显色反应分为两类 络合反应 氧化还原反应 其中络合反应是主要的显色反应 显色反应的要求 选择性好 灵敏度高 有色化合物的离解常数要小 有色化合物组成要恒定 显色剂有颜色时，要求有色化合物与显色剂的颜色差别要大，以减小试剂空白 显色反应的条件要易于控制 显色剂 无机显色剂 硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢 有机显色剂 邻菲罗琳、双硫腙、铬天青S等 反应条件的选择 显色剂的用量 显色剂应是过量的，保证显色反应的完全。但是显色剂过量太多，容易引起副反应，造成结果偏差。 反应条件的选择 溶液的酸度 1.溶液的酸度不同，显色化合物的组成和颜