紫外可见分光光度法.ppt

测量条件的选择：除高效显色剂外，分光光度法的准确度和灵敏度还与适宜的测量条件相关，包括入射光波长、吸光度读数范围和参比溶液的选择。 * 12化教分析化学 * §11.4 吸光度的测量及误差控制 1. 测量波长的选择 原则：“吸收最大，干扰最小” * 12化教分析化学 * 一、测量波长和参比溶液的选择 415 500 A 配合物 试剂 ?/nm ?1 ?2 2. 参比溶液的选择 参比液的选择方法 溶剂作参比 　试液空白(不加显色剂)作参比 试剂空白 (不加试样溶液)作参比 加掩蔽剂(M)后的试液作参比 试液无吸收，显色剂无吸收 试液有吸收，显色剂无吸收 试液无吸收，显色剂有吸收 试液有吸收，显色剂有吸收 * 12化教分析化学 * 二、比尔定律的偏离 * 12化教分析化学 * 依据Beer定律，A与C关系应为 经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面 （一）光学因素 （二）化学因素 * 12化教分析化学 * （一）光学因素 1．非单色光的影响 Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度这就使分离出来的光具一定的谱带宽度 * 12化教分析化学 * 2．杂散光的影响 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值 3．反射光和散色光的影响 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光直接对T产生影响 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光的影响 使光程↑，A↑，吸收光谱变形 * 12化教分析化学 * （二）化学因素 Beer定律适用的另一个前提：稀溶液，浓度过高会使C与A关系偏离定律 对于一个已显色的配合物，可能发生下面的离解反应： MR M + R c(1-?) c? c? 即金属离子的总浓度c不同，解离度?不同，必然会造成对比尔定律的偏离。 * 12化教分析化学 * （三）介质均匀程度 如加入过量的显色剂，则有： 只要[R]足够大，且恒定，则?就保持不变，就不会偏离Beer定律。 Beer定律要求吸光物质是均匀非散射的。如介质不均匀则产生散射、反射等现象，必然导致Beer定律的偏离。 微分： 两式相除得： 以有限值表示可得： 若读数的绝对误差为△T=1%，用不同的T代入上式，可得相应浓度测量的相对误差△c/c，作图　 测定结果的精度常用浓度的相对误差△c/c表示, （Δc/c）不仅与仪器的透光度误差ΔT 有关，而且与其透光度读数T 的值也有关 * 12化教分析化学 * 三、吸光度测量的误差　 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.434 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 实际工作中，应控制T在10～70％, A在0.2～0.7之间 (调c, b, ?) 最佳值 最佳读数范围 * 12化教分析化学 * 【例】某一有色溶液在2.0cm的吸收皿中，测得透光率T＝1％，若仪器透光度的绝对误差△T＝0.5％，计算 （1）测定的浓度的相对误差△c/c （2）为使测得吸光度在最适读数范围内，溶液应稀释或浓缩多少倍？ （3）若浓度不变，而改变比色皿厚度(0.5 cm, 1.0 cm，2.0 cm，3.0 cm)，则应选择那种厚度的吸收皿最合适，此时△c/c为多少？ * 12化教分析化学 * 解：（1） （2）A=-lgT=-lg1%=2 设有色溶液原始浓度为co，当b一定时，A＝εbc＝K?c,要使A＝0.2～0.7，则 即稀释3～10倍 * 12化教分析化学 * （3）当c一定时即co，A＝εbc＝K?b，要使A＝0.2～0.7，则有： bo=2 cm 可选用：b=0.5 cm 比色皿 * 12化教分析化学 * * 12化教分析化学 * 四、共存组分的干扰及消除　 控制溶液酸度 加入掩蔽剂 配位掩蔽剂 氧化还原掩蔽剂　 §11. 5 吸光光度分析方法 * 12化教分析化学 * （一）校准曲线法 A＝? b c 一、经典光度分析方法 先配制一系列标准溶液，在最大吸收波长处，测出它们的吸光度，作图，同条件测未知液的吸光度，从图中查出未知液的浓度。 c0 c1 c2 c3 c4 c5 A0 A1 A2 A3 A4 A5 标准系列 * 12化教分析化学 * 0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL) A 。