红豆中几丁质酶的纯化与表征.pdfVIP

第35 卷 第4 期 福州大学学报（自然科学版） VoI. 35 No. 4 2007 年8 月 JournaI of Fuzhou University（NaturaI Science ） Aug. 2007 文章编号：1000 - 2243（2007 ）04 - 0625 - 06 红豆中几丁质酶的纯化与表征 刘心义，徐二华，陈继伟，刘元刚，汪少芸，叶秀云 （福州大学生物工程研究所，福建 福州 350002 ） 摘要：利用硫酸铵沉降、离子交换色谱CM - Sephadex C - 50 、凝胶过滤色谱Sephadex G - 75 以及高效液相色 谱（HPLC ）Poros HS - 20 ，从红豆种子中分离纯化出一种具有抗真菌活性的几丁质酶. SdS - PAGE 显示还原与 非还原状态下该蛋白分子质量分别为27 . 7 和22 . 7 kda ，这表明该几丁质酶分子内含有二硫键. 该酶比活为 14 . 57 U/ mg ，最适反应pH 为5. 4 ，最适反应温度为50 C . 它对棉花枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌与瓜果腐霉病菌 等真菌有明显的抑制作用. 关键词：红豆；几丁质酶；纯化；表征 中图分类号：@814 . 1 文献标识码：A Purification and characterization of a chitinase from the adzuki bean LIU Xin - yi ，XU Er - hua ，CHEN Ji - wei ，LIU Yuan - gang ，WANG Shao - yun ，YE Xiu - yun （Institute of BiotechnoIogy ，Fuzhou University ，Fuzhou ，Fujian 350002 ，China ） Abstract ：A chitinase with antifungaI activity was isoIated from adzuki bean （Vigna ang ularis ）seeds by a procedure containing （NH ）SO precipitation ，ion - exchange chromatography on CM - Sepha- 4 2 4 dex C - 50 ，geI fiItration on Sephadex G - 75 ，and high - performance Iiguid chromatography （HPLC ）on Poros HS - 20 . The protein exhibited a moIecuIar mass of 27 . 7 kda in reduced condition whiIe 22 . 7 kda in oxidized condition on SdS - PAGE ，which indicates that there are disuIfide bonds inside the moIecuIe. The specific activity of the chitinase was estimated to be 14 . 57 U/ mg. The en- zyme expressed its optimum activity at pH 5 . 4 and a temperature of 50 C . It exerted o