纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备及表征.pdfVIP

第24卷第3期 分析科学学报 2008年6月 ANAI。YTICAI。SCIENCE V01．24No．3 JOURNAI。OF June2008 文章编号：1006—6144(2008)03—0254—05 纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备及表征 胡德红，马玉琴，董 飞，韩鹤友’ (华中农业大学理学院，化学生物学研究所，农业微生物学国家重点实验室，武汉430070) 摘 要：采用还原法制备了尺寸大小分别为4、14、30、41nm的纳米金，优化了不同尺 寸的纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备条件。采用紫外一可见吸收光谱、透射电子 显微镜和化学发光的方法对该探针进行了表征。结果表明纳米金兔抗猪IgG化学发 光探针具有很好的单分散性和稳定性。本研究为纳米金兔抗猪]gG化学发光探针的 应用奠定了基础。 关键词：纳米金兔抗猪IgG；化学发光探针；制备；表征 中图分类号：0657．39 文献标识码：A 纳米金是直径在纳米范围的金颗粒或含金的化合物[1]。与其它纳米粒子相比，纳米金具有制备简单、 化学性质稳定、易于标记等优点。因此，纳米金被广泛地应用于生化免疫分析中，其标记技术已发展成为 第四大免疫标记新技术[z-4]。目前，纳米金标记的对象主要有蛋白质、DNA、生物素、亲和素等。兔抗猪 IgG是猪的二抗，现代免疫分析中大多采用检测猪的二抗来间接检测猪病的抗体，因此研究纳米金兔抗猪 IgG化学发光探针的制备对于其在免疫化学发光分析中的应用具有重要意义。 本文研究了纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备条件，并采用多种手段对该探针进行了表征。结 果表明该探针具有很好的单分散性和稳定性。该研究为纳米金兔抗猪IgG化学发光探针在动物疾病领 域的应用奠定了基础。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 EVOLUTION300型紫外一可见分光光度计(美国，Thermo 量仪(中国科学院物理研究所)；H-7650型透射电子显微镜(日本，Hatachi公司)。 氯化钠、无水碳酸钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、聚乙二醇20000(分析纯，国药集团化学试剂有限公 司)；氢氧化钠、硼氢化钠(化学纯，天津市化学纯试剂三厂)；氯金酸、柠檬酸三钠(分析纯，上海试剂～厂)； 兔抗猪IgG(上海伯奥生科技有限公司)；牛血清白蛋白(罗氏公司(Roche))。其它试剂均为分析纯。 1．2实验方法 1．2．1纳米金的合成采用柠檬酸三钠还原法Es]制备纳米金(10nm)。采用硼氢化钠一柠檬酸三钠两 nm)。 步还原法[63制备纳米金(10 1．2．2纳米金及纳米金免抗猪lgG的表征将制备得到的纳米金及纳米金兔抗猪IgG复合物分别放在 铜网上，用透射电镜观察其形貌和颗粒的大小。以水为空白，在300～900nm波长范围内扫描，得到四种 粒径的纳米金及纳米金兔抗猪IgG复合物的吸收光谱。将制备得到的纳米金及纳米金兔抗猪IgG复合 物用王水溶解并蒸干，然后用pH2．0的盐酸溶液溶解后，测定其化学发光强度。 收稿日期：2007—1l—02 持计划(NCET一05—0668) *通讯联系人：韩鹤友，男，教授，博士生导师，主要从事化学发光和纳米生物分析方面的研究． 254 第3期 分析科学学报 第24卷 mL纳米金溶液加入1．5 别将1．5 mL不同pH值的磷酸盐缓冲溶液中，混合均匀后，再分别加入30扯L 0．1 min，最后加入20“L10％的NaCl溶液，室温 mg／mL的兔抗猪IgG溶液，振荡混匀，室温下放置20 静置2h，然后进行波长扫描，得到纳米金的吸收光谱，比较不同条件下纳米金溶胶的最大吸收波长、吸光 度。 1．2．4兔抗猪IgG最小浓度的确定