实验四 微生物菌落的观察和细菌的运动性观察.ppt

目 的 要 求 学会观察、识别各种不同的微生物菌落的方法。 掌握平板菌落计数的方法，运用所学的知识详细的描述所分离平板上的各种微生物菌落。 了解普通光学显微镜的构造和原理，熟悉其使用的正确方法。 学习并掌握油镜的使用方法，学会用压滴法或悬滴法观察细菌运动性的基本技术。 实 验 原 理 （一）普通光学显微镜的构造： 1、机械部分：镜臂、镜座、粗调节器、细调节器、聚光升降螺旋、载物台等。---支持、调节、固定等作用 2、光学系统：接物镜、接目镜、照明装置、聚光器等。 D：物镜分辨出物体两点间的最短距离； NA，数值孔径，是物镜的参数之一 ； ?：入射光的波长（可见光平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率； （空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。） ?：镜口角（即入射角）：是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度 。 实 验 材 料 实验三所作的平板培养物： A，在细菌培养基上生长的各种菌落； B，在霉菌培养基上生长的各种菌落。 实验二所作的试管斜面，酒精灯、接种环等。 盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。 菌种：大肠杆菌E.coli，枯草杆菌B.subtilis或实验三所培养菌种 运用所掌握的各种微生物菌落的特点，观察、识别、描述所做样品的两个平板上的所有菌落,并将结果填入表1中。 实 验 程 序Ⅱ（平板菌落计数） 定义:根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征而设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。 对土壤中的微生物进行计数,将结果填入表2中。 显微镜（油镜）的使用： 1、用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2、打开光源，调节光亮度 3、低倍镜观察：粗调、细调 4、依次再进行中倍、高倍观察 5、油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 6、换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7、用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 二、细菌运动性的观察（压滴法 ）： (1) 制备菌液：从幼龄菌斜面上，挑数环菌放在装有1～2mL无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液。 (2) 取2～3环稀释菌液于洁净载玻片中央，再加入一环0.01%的美蓝水溶液，混匀。 (3) 用镊子夹一洁净的盖玻片，先使其一边接触菌液，然后慢慢地放下盖玻片，这样可防止产生气泡。 (4) 镜检：将光线适当调暗，先用低倍镜找到观察部位，再用高倍镜观察。 要区分细菌鞭毛运动和布朗运动，后者只是在原处左右摆动，细菌细胞间有明显位移者，才能判定为有运动性。 二、细菌运动性的观察（悬滴法）： 1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。 2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林（或香柏油）。 3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。 结果与思考题 将观察到的菌落特征填入表1中。 将平板菌落计数的结果填入表2中。 斜面接种要注意那些问题？ 分别绘出高倍镜和油镜下观察到的某细菌（如枯草芽胞杆菌）的基本形态。 油镜观察时，为什么要滴加香柏油？并说明油镜观察应注意什么问题？ * * 实验四 微生物菌落的观察和细菌的运动性观察 对于一些难区别的菌落还应该借助显微镜来观察其细胞形态以进一步做出正确的判断。 霉味 常有泥腥味 多带酒香 一般有臭味 气味 一般较快 慢 较快 一般