食品理化检验霉菌毒素检验.ppt

掌握： 黄曲霉毒素的理化性质和薄层色谱法测定黄曲霉毒素B1的原理和方法 微柱筛选法测定AFTB1的原理及方法 赭曲霉毒素的理化性质和薄层色谱法测定的原理及方法 熟悉： 展青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、玉米赤霉烯酮的测定方法 了解： 霉菌毒素的命名、分类、危害和污染来源 目录 概述 黄曲霉毒素的检验 赭zhě曲霉毒素　 展青霉素 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇 T-2毒素 玉米赤霉烯酮的测定方法 霉菌及霉菌毒素 霉菌：是丝状真菌的俗称，意即发霉的真菌，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。 霉菌毒素的命名与分类 按照产生毒素的霉菌名称来命名 霉菌毒素的分类 霉菌毒素的分类 霉菌毒素的产生条件 水分 pH 温度 湿度 氧气 霉菌毒性与危害 肝、肾、神经、生殖、消化系统的损害 免疫抑制、细胞毒性 致癌、致畸、致突变，如黄曲霉毒素能诱发人、猴、鼠、禽类发生肝癌，致癌所需时间最短为24周。 第二节 黄曲霉毒素的检验 黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFT) 黄曲霉、寄生霉和温特霉的代谢产物 剧毒物，其毒性是氰化钾的10倍，为砒霜的68倍，是目前发现的最强的化学致癌物质之一 黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强 高温高湿地区生产的花生、玉米、大米、棉籽等最容易被污染 黄曲霉毒素的理化性质 耐热，高于280℃裂解；耐光，不耐氧化剂 难溶于水，乙醚、石油醚，易溶于甲醇和氯仿 在碱性条件下，其结构中的内脂环可被破坏形成香豆素钠盐，该盐能溶于水，无毒。 在酸性条件下，能发生逆反应，恢复其毒性。其反应式为： 黄曲霉毒素的分析方法 TLC 酶联免疫吸附法（ELISA） 微柱筛选法 HPLC 薄层色谱法—单向展开法 样品中AFTB1经甲醇-水溶液提取后，浓缩、定容、点样于硅胶G薄层板上，经展开分离后，在波长365nm紫外光下观察蓝紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准比较来确定含量。 样品处理 样品→加正己烷（或石油醚）和甲醇-水溶液，震荡→分层，取甲醇-水层→氯仿萃取→无水Na2SO4→过滤→滤液蒸干→苯-乙腈溶解→备用 点样 　在距薄层板下端的2cm基线上用微量注射器滴加样液，标液，一块板滴加4 个点，点的直径～3mm，大小一致，在一条直线上。滴加样式如下： 　　　　　 第一点　　第二点　　第三点　　第四点 样液　　　　　 —　　　　 20 20　　　 20 μl 淡标 (0.04 μg/ml) 10 — 10 — μl 浓标 (0.2 μg/ml) — — — 10 μl （最低荧光点） （样点） （荧光定位） 预展及展开 观察及确证 确证点样操作 第一点　第二点　第三点　第四点 样液μl — 20 — 20 淡标（0.04 μg/ml） 10 — 10 — 三氟乙酸 1小滴　　１小滴　　 —　 　　　—　　　　　　　　　　　　 （反应5min ，热风吹2min ，40℃） 定量操作方法 定量操作方法 如样点的荧光强度与淡标点的荧光强度一致，则样品中AFTB1含量为0.0004μg 如样点的荧光强度比最低检出量强，则根据其强度估计减少滴加微升数或将样液稀释后再滴加不同微升，直至样点的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致。　　　 高效液相色谱法测定AFTB1 样品中的黄曲霉毒素经C18柱分离，用带荧光检测器的高效液相色谱仪检测，以保留时间定性，峰面积或峰高定量。 样品提取 样品净化和衍生物反应 高效液相测定参考条件 检测器：荧光检测器 激发波长：360nm 发射波长：425nm 色谱柱：C18 流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾（1+1 ）