NQAD检测原理及应用.ppt

* 这是分别使用NQAD和PDA对蛋白标准样品分析结果的比较。 使用NQAD检测，第五个溶出的肌红蛋白的理论塔板数约是使用PDA检测时的两倍。 这是因为NQAO与LC-MS相似，是将样品气化后进行检测，因此没有样品池容积这一概念，所以理论塔板数高。 另外，红色点线圈起来的地方，相比PDA的色谱图，NQAD图中有消失的色谱峰。这个有可能是挥发性杂质在检测时挥发掉的缘故。 并且，使用NQAD检测，由流动相所引起的基线波动也得到了改善。 * 这个是将NQAD和PDA串联起来检测多肽标准样品的分析例。 下图是将PDA和NQAD色谱图重叠起来的结果。 上图是只将NQAD色谱图扩大的结果。 从图中可以看出，PDA得到的色谱图受基线漂移影响非常明显，而NQAD所受影响很小，并且得到了与PDA同等的灵敏度。 与之前的蛋白分析相比，多肽检测时，NQAD得到了更低的检测下限。 补充 从目前的结果来看，通过氨基酸，多肽和蛋白分析来比较NQAD和PDA时，氨基酸的分析，NQAD灵敏度更好。多肽分析，两种检测手段相差不多。蛋白分析时，PDA的灵敏度更好。 * 这是胎球蛋白的胰蛋白酶分解产物的分析例。 胎球蛋白是一种糖蛋白，通过胰蛋白酶进行酶处理后，会生成键合了糖链的多肽和不键合糖链的多肽。 上图是NQAD，下图是PDA检测得到的色谱图。在这个应用例中，是将NQAD和PDA串联起来进行检测的。 糖蛋白的糖链部分UV吸收弱，重量大，所以使用NQAD检测，要比PDA灵敏度更高。 因此，使用NQAD，更容易检测出糖蛋白。对于合成糖蛋白以及进行基础研究的客户，这个数据值得参考。 * 这是使用MF色谱柱的分析例。 MF色谱柱是不需要前处理可以直接对生物样品进行分析的色谱柱。 但是为了防止蛋白质吸附到色谱柱上和延长色谱柱寿命，流动相通常使用高浓度的盐。 虽然这种高浓度盐的流动相不适合LC-MS，但却可以使用NQAD进行检测。 这些数据展示了这个分析得到了良好的回收率。 本次使用的血清样品里，添加了具有UV吸收的卡马西平和苯妥英。将血清样品直接进样，对于没有紫外吸收和难以离子化的化合物可以利用NQAD进行检测。 * 这个是亲水性化合物单糖二糖的分析例。 对于没有UV吸收且不挥发性的糖类来说，NQAD是非常适合的检测器。 进行糖分析时，因为是亲水性化合物，通常使用硅胶柱或是氨基柱，在HILIC模式下进行分析。 但是，这里使用了其他公司的聚合物基质的氨基柱进行分析，主要有以下原因。 有很多报导称使用硅胶基质色谱柱，在HILIC模式下进行分析时，从色谱柱会溶出很多物质，影响检测灵敏度。 因此，我们使用了其他公司的聚合物基质的氨基柱进行分析。 结果发现，检出下限达到20～30ng，得到了比RI更好的灵敏度。 另外，我们公司有专门的糖分析检测器PAD（脉冲式电化学检测器）。 PAD和NQAD各有千秋，主要是根据客户的需求向客户推荐相应的检测器。 但从这次的分析结果来看，我们发现NQAD分析糖的灵敏度，与柱后打碱，用PAD检测得到的灵敏度在同等水平上。 * 这是分别使用NQAD和RI检测三氯蔗糖（二糖）的分析例。 三氯蔗糖虽然是亲水性的糖，但却可以在反相模式进行保留。 使用CAPCELL CORE AQ对其进行保留。与RI相比，NQAD的灵敏度提高了100倍。 * 这是在食品领域有分析需求的糖醇的分析例。 色谱柱使用聚合物基质的氨基柱。 使用NQAD，可以达到几个ng的检出下限，远远高于RI的灵敏度。并且，有较宽的动态范围（50ng~12.5ug）。标准曲线的线性好，相关系数为0.990到0.999。 * 这里介绍将NQAD作为LC-MS的辅助检测器的分析例。 对添加了利血平的血清进行除蛋白处理后，在相同条件下使用LC-MS/MS和NQAD进行检测并将结果进行比较。 如左图所示，使用LC-MS只对利血平进行了检出，无法确认基质和共存物质的影响。 但是使用NQAD可以很容易对基质及共存物质的影响进行把握。这个结果将会以墙报的形式发表在9月召开的质量分析学会上。 * * 这是在梯度条件下磺胺的分析例。 梯度条件下，随着有机溶剂含量的增加，峰强度和峰面积都有增大的趋势，不能得到一定的响应。 接下来将介绍改善方法，以供参考。 * 为了在梯度条件下得到一定响应，分别对四台泵的双梯度洗脱（上图）和柱后一台泵补充有机溶剂（中图）的两种方法进行考察。下图是按照通常条件分析得到的谱图。 通过上图，中图中所使用的方法，水比例高的初始梯度下溶出的色谱峰，特别是峰1的面积和强度都得到了改善。 并且，四泵双梯度和一泵补充的两种方法，得到了几乎相同的结果。 通过比较六种化合物的峰面积值，可以看出得到了几乎一定的响应值。 综上所述，在梯度洗脱时，以上两种方法都能够得到一定的响应。 并且，