大头典竹叶片蛋白质组学双向电泳技术体系优化.doc

大头典竹叶片蛋白质组学双向电泳技术体系优化 　　摘 要：目的：为了获得清晰的蛋白凝胶图谱，建立适用于大头典竹蛋白组学双向电泳的优化体系。方法：对大头典竹蛋白提取方法、胶条的水化运行方式、等电聚焦（IEF）程序的设置、蛋白上样量等步骤进行优化。结果：大头典竹的蛋白斑点主要分布在pH5～8的范围；三氯乙酸-丙酮法与酚抽结合法更适合大头典竹蛋白的提取；IPG胶条胶面向上、被动水化方式、蛋白上样量为50μL，效果更好。结论：通过建立双向电泳（2-DE）的优化体系，获得的蛋白点均匀、清晰、横纵条纹少的凝胶图谱，提高了分辨率，为大头典竹差异蛋白组学研究奠定了基础 关键词：大头典竹；双向电泳；蛋白组学 中图分类号 Q946-33 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）05-0041-05 Abstract：[Objective]In order to obtain a clear protein gel electrophoresis，the optimal two-dimensional electrophoresis system suitable for D.beecheyana var. pubescens was established. [Methods]The total protein extraction method，hydration operation mode of strip， program arguments setting of isoelectric focusing and protein amount were optimized to establish an optimal two-dimensional electrophoresis system suitable for D.beecheyana var.pubescens. [Results] Bamboo protein spots were mainly distributed in the scope of the pH5-8. Using trichloroacetic acid - acetone method combined with phenol extraction method is more suitable for the extraction of the D.beecheyana var. pubescens protein. Placing the surface of strip up-side down， passive hydration mode，50μL amount of protein is benefit to obtain optimal effect of gel electrophoresis.[Conclusion] Through the establishment of two-dimensional electrophoresis （2 DE） the optimization of the system， obtaining protein point uniform，clear， map of transverse and less longitudinal stripes gel electrophoresis and improving the resolution，provided the basis for further studies of the proteomics for D.beecheyana var.pubescens. Key words：D.beecheyana var. pubescens；Two-dimensional electrophoresis；Proteomics 大头典竹（Dendrocaiamopsis beecheyana Var pubescens P.F.Li）别名新竹、大头竹，属禾本科竹亚科绿竹属。大头典竹具有成活率高、生长快、适应能力强等特点，大型的丛生竹大头典竹已成为福建漳州东山岛主要的蓄水防风树种，具有很??的土层固沙能力[1]，完全适合在沿海沙地生长[2]。目前，对大头典竹的研究停留在生理水平上，而从分子水平上研究大头典竹的机理至关重要 蛋白质是构成生物体细胞、组织的重要组成部分之一，是生命活动主要的承当者[3]。蛋白质在生命过程中扮演着重要的角色，是生命代谢活动的体现者，协助参与完成生命中的各项活动。随着植物基因组研究的不断深入，有关蛋白质组学的研究逐渐成为了人们关注的重点。构建一个可行、可信的蛋白质技术的优化体系，来分析蛋白质组学的差异性研究是至关重要的。蛋白质组学