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【2017年整理】CHO细胞大规模悬浮培养流程简介
CHO细胞培养流程简介
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一 悬浮培养特点(suspension culture)
非贴壁依赖型细胞的一种培养方式
细胞悬浮于培养基中生长或者维持
某些贴壁依赖型细胞经过适应和选择后也可用此方法培养
使用振荡或者转动装置使细胞始终处于悬浮状态
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二 CHO细胞大规模悬浮培养工艺流程
细胞株 摇瓶 WAVE或者种子罐
收货细胞液 反应器培养
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1 细胞复苏
将水浴锅温度调至37℃
从液氮罐中取出冻存管,用镊子夹住迅速放入水浴锅中晃动,直至完全溶解后将冻存管表面消毒转移至超净工作台内进行操作
将细胞悬液转移至15ml离心管内,加入约10ml培养液,轻轻吹打混匀
将细胞悬液经800-1000rpm离心5分钟,弃去上清液
向细胞沉淀加入10ml培养液,吹打均匀后将细胞悬液转移至摇瓶内,加入适量培养液,开始培养
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细胞复苏注意事项
注意全程无菌操作
溶解冻存细胞时速度一定要快,避免缓慢升温细胞内形成冰晶,对细胞造成损伤
计算合适的接种密度,一般CHO细胞培养的接种密度范围在3.0-6.0*10E5个/ml
注意安全:取出冻存管时防止冻伤,同时注意有无液氮渗透进入冻存管,防止液氮迅速气化导致冻存管爆炸造成人员危险
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2 摇瓶细胞传代
摇瓶细胞培养2-3天后,细胞密度增高,营养物逐渐耗尽,需要对细胞进行扩培
根据细胞密度计算扩培体积
当达到反应器扩培接种细胞数量要求后,停止摇瓶培养,接种至反应器进行扩培
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3 反应器扩培
在超净台内将摇瓶细胞合并至接种瓶内
用无菌焊接机将接种瓶管路与反应器管路无菌焊接,将细胞液打入反应器进行扩培
当反应器内细胞密度达到要求后,接种至下一级反应器开始生产阶段培养
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4 反应器生产阶段培养
取样
补碱
补料
补糖
收获
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取样
取样瓶灭菌
将取样瓶连接至反应器取样口,开始管路灭菌
灭菌完成后等待管路冷却
开始取样
取样完成后用纯蒸汽冲洗取样管路
将所取细胞液测定细胞密度、活力、pH值等参数
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补碱、补糖、补料
当反应器内pH值低于6.8左右时,需要进行补碱
当反应器内糖含量低于2g/L时,
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