麒麟菜中多肽的提取及多肽的抗血小板聚集与抗菌活性.PDF

·１０３６ · 医学研究生学报 ２０１６年１０月 第２９卷 第 １０期　 Ｊ Ｍｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．１０，Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１６ 论　 　 著 （基础研究） 麒麟菜中多肽的提取及多肽的抗血小板聚集和抗菌活性 刘　 彬，余华军，伍　 俊，崔运忠，张海涛 　 　 ［摘要］　 目的　 从天然活性物质中寻找新的抗血小板药物是筛选新型抗血小板聚集药物或药物前体的一个重要策略。 文中建立从麒麟菜中纯化多肽的方法，并研究其抗血小板聚集、抗菌的活性。 　 方法　 用酸处理和ｓｅｐｈｄｅｘＧ⁃５０凝胶层析法 从麒麟菜中提纯小分子多肽，菌株用ＬＢ培养基培养，收集对数生长期的细菌，分别加入对照品（即样品中加入０μｇ／ ｍＬ 的多 肽）、不同浓度的多肽（５、１０、２０、４０μｇ／ ｍＬ）、青霉素（６４μｇ／ ｍＬ）的样品在３７℃培养２４ｈ后取出。 用比浊法检测对照品和多肽 ＋ 样品对大肠埃希菌（Ｄ１３１４）和金黄色葡萄球菌（ｓ．ａｇｒ 、ＲＮ４２２０）生长的影响，采用全血血小板聚集仪检测麒麟菜低分子多肽 对凝血酶诱导的血小板聚集的影响。 　 结果　 ５０、１００、１５０、２００ｇ麒麟菜多肽提取得率分别为０．３８２％、０．４０５％、０．３８９％、 ０．３８９％。 经凝胶层析纯化样品在ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 中显示为单一蛋白质条带。 相对分子质量约为３０００。 大肠埃希菌（Ｄ１３１４）、金黄 ＋ 色葡萄球菌（ＲＮ４２２０、ｓ．ａｇｒ ）对多肽样品及青霉素较敏感，且随多肽浓度增加，抑菌效果增强。 与对照品血小板最大聚集率 ［（９．００±３．７４）Ω］比较，２．５、５、１０μｇ／ ｍＬ多肽样品［（４．９８±０．８２）、（４．３３±０．４７）、（２．２５±０．５０）Ω］和血栓通［（５．０８±１．２１）Ω］明显 减少（Ｐ＜０．０１），与血栓通比较，多肽样品对血小板最大聚集率减少（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性。 ２．５、５、１０μｇ／ ｍＬ多肽样品、血 栓通对血小板聚集的抑制率分别为４４．７％、５１．９％、７５．０％。 　 结论　 文中建立的方法可从麒麟菜中成功提取到纯化的麒麟菜 低分子多肽，且能显著有效抑制血小板聚集及细菌的生长。 提取的多肽是潜在的抗血小板药物。 　 　 ［关键词］　 麒麟菜；多肽；血小板聚集；抗菌 　 　 ［中图分类号］　 Ｒ５５８　 　 　 ［文献标志码］　 Ａ　 　 　 ［文章编号］　 １００８⁃８１９９（２０１６）１０⁃１０３６⁃０４ 　 　 ［ＤＯＩ］　 １０．１６５７１／ ｊ．ｃｎｋｉ．１００８⁃８１９９．２０１６．１０．００６ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｅｕｃｈｅｕｍａ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ １ １ １ ２ １ ＬＩＵ Ｂｉｎ ，ＹＵ Ｈｕａ⁃ｊｕｎ ，ＷＵＪｕｎ ，ＣＵＩ Ｙｕｎ⁃ｚｈｏｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ⁃ｔａｏ （１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ ５２４０００，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ；２．Ｈａｉｋｏｕ Ｆｏｕｒ Ｄｅｇｒｅｅｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｈａｉｋｏｕ ５２１０００，Ｈａｉｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） 　 　 ［Ａｂｓｔｒａｃｔ ］　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｅｕｃｈｅｕｍａ ｉｓｒｉｃｈｉｎｎｕｔｒｉｅｎｔｓａｎｄｃａｎｂｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｏｆｆｏｏｄａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｅｄ．Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｆｅａｓｉｂｌｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｕｒｉｆｙｉｎｇｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓｆｒｏｍｅｕｃｈｅｕｍａａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｒａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅ⁃ ｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ．　 Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｗｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｅｕｃｈｅｕｍａ ｗｉｔｈ ａｃｉｄｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ