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几种特殊染色
Masson三色染色法
丽春红酸性品红液的配制:
丽春红(Ponceau 2R) 0.7g
酸性品红(acid fuchsin)0.35g
冰醋酸 2ml
蒸馏水 98ml
苯胺蓝液
苯胺蓝 0.2g
冰醋酸 2ml
蒸馏水 98ml
染色步骤
切片脱蜡至水,1%高锰酸钾氧化切片5min
水洗 ,1%草酸漂白1min
水洗,丽春红酸性品红液染5min
0.5%醋酸水溶液洗
1%磷钼酸分化
0.2%苯胺蓝滴染2-5min
0.5%醋酸水溶液洗
直接入无水酒精快速脱水
二甲苯透明,中性树胶封固。
结果
胶原纤维蓝色
胞质、肌纤维、红细胞红色。
注意事项
组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。 。
Masson染液每次染色前现配为佳,可使着色鲜艳。
切片在酒精中脱水,时间不宜过长,否则会将着染的颜色脱去。
切片保存所着染的颜色一般为1—2年,以后会随着时间的延长而逐渐褪去,应予注意。
用1%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。
Gordon 和Sweets法
氨银溶液的配置
取10%硝酸银水溶液5ml,逐滴加入浓氨水,至形成沉淀物,注意氨水不能加入过多。取3%过氧化钠5ml加入,产生沉淀,再逐滴加入氨水至沉淀再度被溶解。加蒸馏水制成50ml溶液,即可使用,贮藏于4℃冰箱中。
染色步骤
切片脱蜡至水,0.5%酸性高锰酸钾氧化5分钟。
自来水洗, 1%草酸漂白1-2分钟。
自来水洗, 2%硫酸铁铵媒染切片5-10分钟。
自来水洗,蒸馏水洗两遍。
氨银溶液浸染数秒至2分钟。
蒸馏水冲洗数次。
10%福尔马林还原2分钟。
自来水洗, 0.2%氯化金调色。
自来水洗, 5%硫代硫酸钠处理3分钟。
自来水洗,核固红染核。
脱水,透明,封固。
结果:
网状纤维显示黑色,
细胞核显示红色。
注意事项
所使用的玻璃仪器,须用清洁液处理。
配制氨银溶液时,氨水加入的量不能过多或不足,过多会使液体过碱,滴染时,切片容易脱落;过少则浸染效果不佳。
切片氧化漂白应彻底,不能使残存的福尔马林留于片上,否则将导致过早还原而使浸染不均匀。
如果有某种原因而导致切片脱落时,应使用涂胶的载片,以增加附贴性。
氨银溶液以新配为佳,但也可保存于4℃冰箱中达一个月左右,这种液体易挥发,用后即须盖紧,当沉淀物出现时,该溶液应抛弃。
糖原PAS染色(淀粉酶消化法)
显示胆管基底膜和Kupffer细胞
糖原PAS染色(淀粉酶消化法)
淀粉酶溶液:
α- 淀粉酶 9g
蒸馏水 120ml
1%过碘酸:
过碘酸 0.5g
蒸馏水 50ml
Schiff液:
碱性复红 1g
1mol/L盐酸 20ml
重亚硫酸钠 2g
蒸馏水 200ml
染色步骤
切片脱蜡至水
浸入淀粉酶溶液,37 ℃温箱孵浴10min
水洗后加0.5%过碘酸,37 ℃温箱孵浴10min
水洗后加Schiff液,37 ℃温箱孵浴5-10min
苏木素染核2min
分化、反蓝,脱水,透明封固。
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