脑出血及脑缺血模型大鼠脾淋巴细胞的蛋白质组学研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（９）：７～１３ 脑出血与脑缺血模型大鼠脾淋巴细胞的 蛋白质组学研究 １ １ ２ １ １ １ 熊新贵 　梁清华 　陈　疆 　曾年菊 　区健刚 　范　荣 （１中南大学湘雅医院中西结合研究所　长沙　４１０００８　２中南大学湘雅医院远程医疗中心　长沙　４１０００８） 摘要　目的：通过比较正常与脑出血及脑缺血模型大鼠脾淋巴细胞蛋白质表达的差异，初步探讨 细胞免疫功能与脑血管病之间的关系。方法：将 ＳＤ大鼠随机分为正常组、脑出血模型组（采用 ＶＩＩ型胶原酶诱导脑出血）和局灶性脑缺血模型组（采用线栓法造成大脑中动脉阻塞），分离大鼠 脾淋巴细胞，提取总蛋白质后进行双向凝胶电泳，考马斯亮蓝染色，ＰＤＱＵＥＳＴ软件分析，对差异蛋 白质点采用基质辅助激光解析电离质谱（ＭＡＬＤＩＴＯＦＭＳ）技术进行鉴定并分析。结果：胶质细胞 ? ? 成熟因子 等９个蛋白在脑出血和脑缺血模型组表达上调，膜联蛋白ＩＩＩ在脑出血和脑缺血模型 γ 组表达下调。结论：建立了分辨率高重复性较好的脑出血及局灶性脑缺血脾淋巴细胞总蛋白的 双向凝胶电泳图谱，并鉴定一些与脑血管病脑损伤相关的差异表达蛋白质，为深入研究脑血管病 细胞免疫功能改变与脑血管病之间的关系奠定了基础。 关键词　蛋白质组学　动物模型　脑出血　脑缺血　脾淋巴细胞 中图分类号　ＴＱ９３ ［６］ 　　脑卒中是严重威胁我国中老年人健康和生命的一 增高；Ｖａｎ等 发现，鼠大脑中动脉阻塞后，脑缺血区 种常见急性脑血管病，包括出血性卒中和缺血性卒中 神经元、内皮细胞和胶质细胞上补体受体（Ｃ３ａＲ， 两大类，据世界卫生组织统计，我国脑卒中的发病率和 Ｃ５ａＲ）蛋白水平和ｍＲＮＡ的表达都上调；脑出血后血 死亡率已经高居世界首位，因此对本病病理机制和防 肿周围组织也产生大量Ｃ３ａ和Ｃ５ａ，刺激炎症细胞合成 治措施的研究受到了高度重视。 ＴＮＦ，进而进一步激活细胞产生细胞因子、神经营养因 　　近年来随着分子生物学技术的飞速发展，从基因 ［７］ 子和急相蛋白，并增加粘附分子的表达 ；Ｇｅｎｄｒｏｎ 水平对急性脑血管病的研究取得了重要进展，大量文 ［８］ 等 在对Ｗｉｓｔｅｒ鼠大脑中动脉阻断模型（ＭＣＡＯ）观察 献显示急性脑血管病存在细胞免疫介导的炎症反 中发现缺血急性期脾脏淋巴细胞总数显著减少。这些 ［１］ 应 ，涉及多种免疫因子和免疫细胞，介导脑损伤和脑 改变既与脑血管病脑损伤有关，又可对脑损伤产生保 ［２］ 保护的双重作用。ＣａＳｔｉｌｌｏ等 发现，脑出血患者血肿 护作用，与本病的发生、发展及转归关系密切。脾脏是 周围水肿程度与肿瘤坏死因子 （ＴＮＦ ）水平呈显著 ?α ?α 重要的免疫器官，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。 正相关，还可诱导白细胞、受损组织细胞释放更多细胞 蛋白质组学的出现及其快速发展，为研究各种疾病的 ［３］ 因子；Ｎａｗａｓｈｉｒｏ等 运用 ＴＮＦ结合蛋