糖调节蛋白78在缺血再灌注损伤心肌中表达意义.PDF

。494‘ ·研究报告· 糖调节蛋白78在缺血／再灌注损伤心肌中表达的意义 高渡李忠诚 【关键词】糖调节蛋白78；缺血／再灌注损伤，心肌； 缺血预处理 热休克蛋白70(HSP70)是广泛存扎冠脉。I／R组和IP组按照再灌注时间表示，采用方差分析和LSD检验，P 在于原核和真核生物细胞内的一种蛋白 又分为0．5、2、4h亚组。 0．05为差异有统计学意义。 质，其基本功能为帮助新生蛋白质的正 1．2检测指标及方法 2结果 确折叠、移位、维持，以及受损蛋白质的 1．2．1免疫组化染色：取左心室前壁损2．1 GRP78免疫组化结果(表1)：与假 0．5h、2 修复、移除、降解，对肾脏等组织器官缺 伤心肌，经固定、包埋、切片、常规脱蜡至 手术组比较，I／R h组GRP78 4 血／再灌注(I／R)损伤具有保护作用[1]。水等过程，制备免疫组化切片；柠檬酸修 表达无差异；I／R h组明显升高，且明 糖调节蛋白78(GRP78)也叫免疫球蛋复液(pH值6．0)煮沸，GRP78抗体显高于l／R0．5h、2h组(均P0．05)。 白重链结合蛋白，因与HSPT0家族具有(稀释度1：100)室温过夜，二抗室温孵IP0．5、2、4 h组GRP78表达分别高于 育1h，3，3-二氨基联苯胺(DAB)显色，0．5、2、4 高度同源性，而被认为是HSPT0家族成 I／R h组(均PO．05)。 员之一。GRP78能抑制细胞毒性，对抗苏木素复染。GRP78单克隆抗体IgG购 表1各组大鼠心肌I／R损伤后GRP78 细胞凋亡，是维持胚胎细胞生长和潜能 自美国SantaCruz公司，原位末端缺刻 免疫组化结果比较(j±s) 细胞存活的必备物质基础乜]。GRP78在标记法(TUNEL)凋亡检测及免疫组化 多种组织I／R损伤中表达上调，对心肌相关抗体试剂盒购于北京中杉金桥生物 细胞的存活具有重要的保护作用[3]。目有限公司。心肌细胞质呈棕黄色颗粒为 前国内关于缺血预处理(IP)对I／R损伤阳性，在阳性表达区随机选5个视野，测 心肌中GRP78表达变化的影响尚未见定平均吸光度(A)值作为相对表达量。 报道，本实验旨在观察IP对GRP78表1．2．2 逆转录一聚合酶链反应(RT— 达的影响，以期为心肌I／R损伤的研究PCR)检测GRP78mRNA表达：取左 和临床干预性治疗提供实验依据。 心室前壁损伤心肌，组织匀浆后，用 l材料与方法 TRIzol一步法提取总RNA，逆转录 注：I／R：缺血／再灌注，GRP78：糖调节蛋白 1．1 动物分组及I／R损伤模型建立： 为cDNA。引物序列：GRP78上游 78，IP：缺血预处理}与假手术组比 CTTGCCGTTCAAGGT 5’一GTT 0．5 雄性SD大鼠56只，体重(270士30)g， 较，。P0．05f与I／Rh和2h组比 TACAGTAAC 由中国医学科学院放射医学研究所实验 GG一3’，下游57一TGG 较，6P0．05，与I／R相应时问点组比 AAC