枯草芽胞杆菌谷氨酰胺转氨酶在谷氨酸棒杆菌中的分泌表达和.PDF

第 31 卷 第 期 天津科技大学学报 Vol. 31 No. 2016 年 月 Journal of Tianjin University of Science Technology 2016 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 枯草芽胞杆菌谷氨酰胺转氨酶在谷氨酸棒杆菌中的 分泌表达及诱导条件的优化 黄 琳，刘逸寒，李明杰，李 瑞，郭 伟，桂 爽，路福平 (工业发酵微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，工业酶国家工程实验室， 天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘 要 ：本文通过重叠 PCR 技术构建获得枯草芽胞杆菌 (Bacillus subtilis)来源的谷氨酰胺转氨酶 (transglutaminase ， TG)(BTG)重组基因 Sprodbtg ，该基因依次包含 SD 序列、谷氨酸棒杆菌信号肽 ΔS0949 序列、proD-BTG 基因 ，并将该 目的基因克隆入大肠杆菌–谷氨酸棒杆菌穿梭表达载体 pXMJ19 中构建重组质粒 pXMJ19-Sprodbtg．随后，重组质粒电 转入谷氨酸棒杆菌 (Corynebacterium glutamicum)ATCC13032 中进行诱导表达，并对重组菌株的诱导条件进行优化．结 果表明 ：重组菌株 C. glutamicum ATCC13032/pXMJ19-Sprodbtg 表达重组酶原蛋白 proD-BTG 经活化后，BTG 的活力 达到 (41.23 ±2.01)U/L ；在重组菌培养 12 h 后诱导 、IPTG 终浓度 0.8 mmol/L、诱导 40 h 的最优诱导条件下，BTG 的活 力达到最高，为 (55.62 ±2.34)U/L ，较优化前提高了约 34.90%,． 关键词 ：谷氨酰胺转氨酶；谷氨酸棒杆菌；枯草芽胞杆菌；分泌表达；条件优化 中图分类号：Q814.4 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-6510 (2016)00-0000-00 Expression of the Transglutaminase from Bacillus subtilis and Optimization of Fermentation Conditions for Corynebacterium glutamicum HUANG Lin ，LIU Yihan ，LI Mingjie ，LI Rui ，GUO Wei ，GUI Shuang ，LU Fuping (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology