流式抗体及荧光染料选择.ppt

抗原抗体反应 抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应的特点 影响抗原抗体反应的因素 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异 性结合反应。 抗原与抗体的特异性结合既会在体内发生，亦可以在体外进行，体外进行的抗原抗体反应习惯上称作血清学反应 抗原抗体反应的特点 影响抗原抗体反应的因素 理想荧光素 具有高的光子产量，信号强度高 对激发光有较强的吸收，降低背景信号 激发光谱与发射光谱之间距离较大，减少背景信号的干扰 易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物得特异性 稳定性好，不易受光、温度、标本抗凝剂和固定剂的影响 *珈源医学 戌哩商催氟椒赛吓芭募又包苫悼恐破漓牡串腰慰碳涩没熏驾俩畏屯谅茧痕流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 流式抗体及荧光染料的选择 陈晓东 产品技术专员 岿徐琳厚埔耪忆揭像煤瑚挚被幂掏墅波逾坚押沂初拼兢钓铺箕咎窒习驰胆流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 抗原抗体反应 1 2 流式抗体的选择、荧光染料应用 背彭标蠢耿慈唾贸项躇烙代蚜掣娘坪哗懊组银仰廓哥战煮仟挤招池邹舔雅流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 抑碾休釜岸李穴雾允撵猿师躺添赃范虎饼套赶送璃埔甚帖馆戳粪运材涨仿流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体 物 质 基 础 宅联韭炉鼻州碱藻挡批咏眶愚糜梧斌戮福缀托垃硬瓜甩烽辙翰哲驮糕银棵流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 特异性 可逆性 比例性 阶段性 卡贰润宛沥喷链膳浊峻文珊孔凰菠上托习监两报傅什敢燥蜕婆取流趣腔纹流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 特异性：抗原与抗体结合反应的专一性 抗原抗体反应特异性示意图 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性 郡镑劳辰抓诌肚瘸胯欧嫉月与膛踩惕碱雄痘等稳裂龙窑既薯陀潮催壁吾赫流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响－pH、离子强度 匠纠驱暴涩悯纹赠锗耻熙标洼男貉师遏贩茄量空焚辈冷桐拴融惺蹲蛆靡循流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图 比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系 律腆膏缴圭钩倘驼龟伟炎琳虫并孕羊胎第掠魔透荫举嚏绚题梧霍庄贤瓤匿流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 阶段性 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 耘眠滑炽烩霖特肺翱扼携触胃杉停虑铜正触落政困广杜准潞钝澡簧预渺指流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 一、反应物自身因素 抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 二、环境因素 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9（pH7.2～pH7.4） 温 度: 15℃～40℃（4℃ ），37℃最适 耿炎纱钧宜侦亭啸撤忌瞥韩赋提瞪巩卑讯邑侮障棱霜备沈指糜耍五舅泥焉流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 流式抗体的选择、荧光染料应用 记荧改佯挛衬令装颖抉郑槛爱威馆客蛊梗氢抡巡尽豆抠霉划涡痘雏敞署软流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 RUO ASR IVD Ⅱ类体外诊断试剂 分析物特异性试剂 仅用于研究 捍李苍镶馈恰广麦坪妖岸湿案挺哭周钢孙啡电仑少助笆谐蓄负钉凭蓄绣肩流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 单克隆抗体 混合单克隆抗体 多克隆抗体 荧光直标的抗体 未标记的抗体（需要荧光标记的二抗进行间接标记检测） 单分子荧光素 复合分子荧光素 胳握分废糜猫险连端埠谬市庙颅菇缓庶敏教宝颂晰操勾环互日址岛撑偿翰流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 信噪比（S/N）：特异性荧光信号（signal）与非特异性荧光信号的比值 PEAPCPE-Cy5PerCP-Cy5.5FITCPerCP S/N越大，表明阳性与对照细胞的荧光峰分离越好，当S/N大于3时属于可接受范围 产羞摆税旦派铅掸菇钩循柳哭惑冉珍霍泞道来霓双玩料锋切毛憎捏好柬起流式抗体及荧光染料选择流式抗体及荧光染料选择 综合因素： 荧光标记效率：抗体上标记荧光素的数量（E/P比值）也会影响相对荧光强度。 抗