伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)2-萘酸单加氧酶基因(nmo)的克隆及表达.pdf

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% % !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-(./0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 伯克霍尔德氏菌（ ）萘酸单加氧酶 ./’01(*23’$ ! # $% 基因（ ）的克隆及表达 -4( 方向平 丘晓颖 岑英华 孙国萍 （广东省微生物研究所 广州 #%%2% ） 摘 要：通过酶切连接将 的一段 片段（ ）亚克隆到表达载体 !#$%’()#*+ @E * F5#%% G1H ! I6J. EKL6 上，得到重组子E4M$。测序后的E4M$ 重组子! I6J. 插入片段的序列已经登陆欧 洲4NOP 基因库，序列接受号为HF#33。对这一G1H 片段的序列分析显示，此G1H 片段含 有 个阅读框，且在这 个阅读框 端发现一启动子特异序列。再用酶切连接方法得到仅含 #Q 一个阅读框的重组子 ，其阅读框长度为 ，编码 个氨基酸，与已报道的 ERM #6.E 63 ,+’-./*+ 羟化酶（单加氧酶， ）氨基酸序列有 的同源性。 对 萘酸代谢途 ).#0%+ S8C ./, 3! T E4M$ $7 径中 个关键底物的转化实验结果显示，其基因产物仅对 萘酸发生加氧转化反应，而且 ! $7 $7 萘酸浓度有明显的降低，证实此基因是 萘酸单加氧酶基因（ ）。同时发现其基因产物也 $7 /1 可以转化苯甲酸钠。该酶对苯甲酸的加氧转化途径正在研究中。 结果表明， 、 两重组子中 萘酸单加氧酶表达量并没明显区别，但 UGU7VHW4 ERM E4M$ $7 加氧酶酶活却存在显著的差别。推测在启动子后，单加氧酶阅读框前的两个阅读框的基因产 物，对单加氧酶活有促进作用。 关键词：萘酸，单加氧酶，底物 $7 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） X263 H %%%73$%C $%% %#7%#CC7%6 萘酸是具有两个苯环结构的化合物，研究细菌降解 萘酸（ ）的代谢途 $7 $7 $7B9E=-=(9-/ 径的主要意义是因为 萘酸的化学结构与印染行业广泛使用的偶氮染料的骨干单元结构 $7 类似。研究$7萘酸的微生物代谢途径、确定其代谢过程中的酶系统以及对应的代谢基因， 可以为偶氮染料的微生物降解提供理论依据，为通过生物工程技术构建多功能高效的环 ［］