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六倍体柿品种‘藤原御所’杂交后代中九倍体新种质的获得.pdf

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六倍体柿品种‘藤原御所’杂交后代中九倍体新种质的获得

六倍体柿品种‘藤原御所’杂交后代中九倍体 新种质的获得1 房剑锋,张青林,罗正荣 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室,武汉(430070 ) E- mail :luozhr@ 摘 要:本实验采用‘禅寺丸’ (Diospyros kaki Thunb. ‘Zenjimaru’, 2n=6X=90 )花粉与‘藤原御 所’ (D.kaki ‘Fujiwara-gosho’, 2n=6X=90 )杂交,通过幼胚培养获得了一批再生植物。其中, 有 1 株与对照相比,叶片气孔孔径增大、密度降低;叶片DNA 含量为对照的 1.53 倍。因此, 可初步确定为九倍体。 关键词:柿,藤原御所,九倍体植株 中图分类号:S665.2 1. 引言 柿属植物(Diospyros spp. )倍性复杂,有天然存在的二倍体,四倍体,六倍体和九倍体, 但栽培柿(Diospyros kaki Thunb. )中的完全甜柿(pollination-constant nonastringent persimmon, PCNA )则全部是 6 倍体(2n =6X =90 )有核品种(杨勇等,1999;唐仙英等,2000 )。甜 柿的多籽性不仅降低其鲜食价值,对柿饼、柿干等加工也极为不利。前人研究表明,少数无 核柿品种,如‘平核无’、‘渡泽’、‘宫崎无核’等则为 9 倍体(2n =9x =135),表现为三倍体的 染色体行为和伪单性结实特性,且生长发育正常(Zhuang et al. ,1992)。但迄今尚未发现无 核的甜柿品种。Sugiura 等(2000 )采用‘禅寺丸’2n 花粉授粉‘次郎’并结合幼胚培养,成功地 获得一批 9 倍体再生植物。但 2n 花粉供体少、花粉生活力和受精竞争力较弱,应用于育种 实践还存在一些没有解决的问题。Tao 等(2003 )发现‘藤原御所’中存在高频率2n 卵。天然 九倍体和 2n 卵的发现,为甜柿 2n 配子育种开辟了新的途径。我们采用‘禅寺丸’花粉与‘藤原 御所’杂交并结合幼胚培养和倍性鉴定技术,以期为建立中国甜柿 2n 配子育种技术体系奠定 基础。 2. 材料与方法 2.1 材料 供试母本为完全甜柿‘藤原御所’ (D. kaki Thunb. ‘Fujiwaragosho’ ),活体保存在中国林业 科学院亚热带林业研究所柿圃(浙江富阳);父本为不完全甜柿‘禅寺丸’ (D. kaki Thunb. ‘Zenjimaru’),其花粉采自武汉市林业科技推广站郑店品种圃。 2.2 方法 2.2.1 花粉收集及其生活力检测 晴天上午采集含苞待放花蕾,室内剥取花药,25~28℃下阴干,待花药散开后收集花粉 在 4 ℃和干燥条件下保存备用。花粉生活力检测采用悬滴培养法(谷晓峰等,2000 ),随机 观察 6 个视野统计花粉发芽率,每视野花粉不少于 60 粒;以花粉管长度超过花粉直径作为 发芽的直观标志。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金(20030504014 )的资助。 -1- 2.2.2 花粉在柱头上萌发观察 授粉 24 小时后取 10 朵雌花置于固定液(甲醇:乙酸﹦3 :1)中固定。花粉管苯胺兰染 色参考谷晓峰等(2002 ),在 Olympus AH -3 型显微镜下荧光检测。 2.2.3 幼胚培养 授粉后 60 天采取幼果和摘取幼胚进行胚抢救培养。具体程序参考谷晓峰等(2001 )。 2.2.4 植株倍性鉴定 气孔密度及其口径大小观察参照刘明智等(2005 )。采用 PA 倍性分析仪(Ploidy Analyser-I ,Partec )测定叶片 DNA 相对含量,具体方法参考陈绪中等(2004 )。以染色体 数 2n=90 的‘罗田甜柿’组培苗为对照,数据分析采用 Partec 公司 DPAC 软件(Data

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