对比基因组杂交技术在肿瘤遗传学研究中的应用.pdf

一 22 ForeignMedical~：iencesSectionofPath0phys；0L0gyandClinicalMedicine 1997，17(1) (，·l 对比基因组杂交技术在肿瘤遗传学研究中的应用 西安医科大学免疫病理研究室(710061) 垫 凰 ．综述 司履生 审校 午 摘要 对比基因组杂交技术是近几年发展起来一能快速全面分析染色体一个基因组甚至一 ／ 条染色体获得和缺失的分子细胞遗传学方法。其具体方法是分别标记肿瘸DNA和iEg人体胎盘组织中 提取的参照DNA，制成探针，再与正常人体中期染色体铺片竞争性地原位杂交，通过对比各条染色体 DNA序列中两种荧光强度，揭示出肿瘤染色体某一基因的扩增和缺失。 关键词 ：．荭比基冒曲矗_童技术；j t 堡正盈 非随机性染色体畸变 (包括基因缺失、扩 1．2 中期染色体铺片的制备 用植物血凝 增、重排等)与许多肿瘤的发生、发展、预后有直 素刺激后的正常人淋巴细胞，常规方法制备。中 接关系 。]。以往多应用限制性片段长度多态性 期染色体铺片的质量是 e H技术成功的叉一 (RFLP)、带型分析等研究造血系统肿瘤，发现 重要因素，必须保证有 良好的染色体形态 “]。 重排是这类肿瘤最常见的染色体异常0]。然而， 1．3 染色体原位抑制杂交 将分别标记的 实体瘤细胞难以体外培养行染色体分析，严重 等量待测与参照DNA(各 100~-：．200rig)和人类 妨碍了其遗传学的研究。对 比基因组杂交技术 基 因组总 DNA(HumanCot一1DNA)先行杂 (CGH)不仅可用于新鲜组织 ，而且可用于福尔 交，封 其中的非特异性重复序列，然后再与正 马林固定石蜡包埋组织，从而促进了对实体瘤 常人中期染色体铺片杂交，实现靶系列间的特 染色体的研究。 异性结合 。杂交后用DAPI(4，6-二氨基一2一苯酚 1 CGH基本原理及技术 吲哚)静J成G显带标本。 1．1 待剥DNA及参照DNA的制备及标记 1．4 荧光显微雅观察和图像分析 以荧光 从健康人血液或正常人胎盘组织中提取参照 显微镜检测每条染色体上的两种荧光信号，待 DNA，从新鲜瘤组织或培养瘤细胞系中提敢待 测DNA某区带的扩增表现为该区带待测DNA 测DNA，通过缺口平移法进行标记。CGH技术 荧光信号增强，而某区带待参照DNA荧光信 优点是仅需极小量的待溅DNA((1,ug)0】如 号增强说明该区带的缺失。与荧光显微镜相连 使用福尔马林固定、石蜡包埋的组织，可通过延 的冷光源CCD照相机拍摄卞荧光杂交图，以便 长蛋 白酶 K消化时间 3天，以提高 DNA产 进一步综合定量分析，通过特定的计算机软件 量0]如同时应用筒并引物PCR(DOP．PCR)技 处理 得到两种荧光槊交信号的比值。 术扩增，可减少所需瘤细胞量，二千个瘤细胞所 应 同时做待 {鲥：DNA 与参照 DNA 的 提DNA即可满足需要。 cGH，得到每条染色体背景荧光比值，在此基础 DNA标记前后的长度是整个分析成功 的 上，确定每条染色体中轴，至少平均4个染色体 一 个重要 因素，为达到最佳杂交效率，标记后 荧光信号比值，得到每条染色体平均 比值。如附 DNA长度应在 500～2oOObp。标记方法有如 图所示，染色体核型模式图右侧三条竖线代表 下改进：(1)应用荧光素直接标记DNA，减少杂 待测 DNA和参照 DNA 荧光强度 比值的三个 交后操作从而增强杂交信号}(2)缺 口平移法标 阈值。中间线对应为平衡状态，即出现频率最多 记时调节 DNAasel／DNApolymerasel，以得 的观察值，比值为 1。两侧的竖线反映